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3、2叶绿素含量和类萝卜素含量的测定

      实验中叶绿素含量的测定不是用普通的便携式叶绿素测量仪进行测量的，我们选用分光光度计测量法进行测量。首先选取健康正常叶片，避开主叶脉打三孔取样。量取10 lm 80%的丙酮溶液放入干净的试管，将取样的叶片切成细丝放入盛有丙酮溶液的试管中浸泡。用软的橡胶塞堵住试管口，将试管在室温避光条件下静置，直至溶液中的碎叶片发白。长时间浸泡直到叶片发白是为了确保叶片中的叶绿素尽可能完全地溶解在丙酮溶液中，在避光环境下进行浸泡这是为减少叶绿素的分解，增加实验结果的准确性。

      浸泡完成后，先将比色皿用80%的丙酮润洗，再取出浸泡好的液体倒入比色皿中。注意在取出试管和在比色皿中倒入液体是尽量减少对试管的晃动，避免将浸泡液中的叶片碎片倒入比色皿中，而影响测量结果的准确性。选用7225型分光光度计来测量叶绿素和色素,首先测定叶绿素a的吸收峰663 nm处的光密度OD值、然后测量叶绿素b吸收峰645 nm处的光密度OD值、最后测量类胡萝卜素吸收峰470 nm处的光密度OD值。

       经过冻害处理后的油菜植株在室内进行自由恢复，在恢复1h，2h，4h，6h，8h，10h时再次测定对应的叶绿素和类萝卜素含量。

     此外，实验采用SPAD-502叶绿素计（曰本美能达公司）论文网,测定叶片中的相对叶绿素含量(相对值在0-100)。叶绿素计的工作原理是：通过测量油菜叶片在两个波段里面的吸收率(两个波段分别是：400 nm-500 nm的蓝光波段和600 nm-700 nm的红色波段),在上述的两个波段的范围内油菜叶片对光的吸收率可以达到两个峰值,同时油菜叶片在近红外波段是无吸收的。测量叶片的SPAD值时，每一株油菜选取叶片相同部位,避开油菜的主叶脉测量叶片尖部、中部和叶尾部的SPAD值,然后取平均值作为最后结果。SAPD-502叶绿素仪的详细技术参数如图表所示：

SPAD-502叶绿素仪的技术参数

型号 SPAD-502

测量方法 2个波段下的光密度差

测量区域 2*3 m

光源及传感器 2个LED光源；1个S P D(硅光二极管)

显示范围 0-100

内存 30组测量数据，可计算和显示平均数值

3、3水分的测定

       本实验中水分的测定选用L P I 002分析天平对叶片的重量进行测量。首先测量叶片的鲜重`优尔*文+论]文|网\www.youerw.com，然后再将叶片放入恒温的干燥箱中。在105℃下对叶片进行杀青处理20-30分钟,再在70℃的恒温条件下烘干2小时，最后在用分析天平,称叶片的干重。通过比较不同时期的叶片重量来确定叶片的水分。也就是通过对正常叶片的重量和冻害后叶片的重量的测定取其差值，确定叶片冻害后的失水量。