外源硅对甘蓝镉毒害的缓解效应(3)
时间:2020-05-05 14:50 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1.3测定项目与方法 1. 3. 1干重 105 ℃杀青30 min，70 ℃烘干至恒重，测定根系与地上部分干重。 1. 3. 2 元素含量的测定 准确称取0.5 g植物样品，加入 V(硝酸):V(双氧水)=4:1过夜，次日置于消煮炉中消煮，用火焰式原子吸收光谱仪测定Cd、Si、Ca、P、Mg含量。 1. 3.3 MDA、H2O2和O2.-含量的测定 分别准确称取0.3 g植物样，置于研钵中加入1 %三氯乙酸（TCA）3 ml，冰上研磨成匀浆转移至10 ml离心管中，12000 g离心15 min。 MDA含量的测定：取上清液0.5 ml于干净试管中加入1.5 ml 0.5 %硫代巴比妥酸（TBA），摇匀后，90 ℃水浴20 min，冷却至室温，以10000 g离心5 min，取上清测532、600、450 nm处的吸光值，单位以nmol•g-1FW表示。 H2O2含量的测定：取上清液0.5 ml于干净试管中加入0.5 ml 10 mmol/L PBS(PH=7.0)和1ml KI摇匀后，测390 nm处的吸光值。 O2.-含量的测定：采用王爱国等人的方法[8]。 1.3.3 抗氧化相关酶（SOD、CAT、APX）活性的测定 取0.5 g植物样，加5 ml酶提取液（0.1 mol/L,pH 7.0的磷酸缓冲液，20 mmol/L EDTA，10 % pvp，去离子水），冰浴研磨，4 ℃冷冻离心(12000 g, 15-20 min)，取上清液。 SOD（超氧化物歧化酶）：采用氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光化还原法测定； CAT（过氧化氢酶）：取上清液100 ul，加入反应液（1.5 mL 0.1 mol/L PBS(PH=7.0)，10 L 30 % H2O2，1390 L去离子水），测定240 nm处的吸光值。 APX（抗坏血酸过氧化物酶）：取上清液50 L，加入反应液（1.5 mL 0.1mol/L PBS(PH=7.0)，15 L 100 mmol/L ASA，30 L 30 % H2O2，1405 L去离子水），测定290 nm处的吸光值。 1. 4数据处理和作图 采用SPSS 13.0和Excel软件对实验数据进行方差分析和显著性测验。采用Sigma plot 10.0 作图。 (责任编辑：qin) |