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2.3蔗糖和可溶性总糖的提取与含量测定

用热乙醇提取蔗糖和可溶性总糖，蔗糖含量用间苯二酚法，蒽酮比色法测定可溶性总糖含量。

2.4 蔗糖合酶的提取与活性测定

酶的提取均在0-4℃低温下进行。取20粒-80℃冰箱贮存的籽粒，剥壳去胚后，籽粒加3ml提取介质快速研磨，12，000rpm/min 离心15min，取上清夜作为粗酶液。

酶的提取介质为：100 mmol/L Hepes/KOH (pH7.5)，5 mmol/L MgCl2，5 mmol/L DTT，20 mmol/L 巯基乙醇，10 mmol/L 抗坏血酸，2 mmol/L EDTA，1% (w/v)PVP。

酶的反应介质为：0.2ml 的反应介质中含有50mmol/L Hepes/KOH (pH7.5)， 5mmol/L Mgcl2 ，3mmol/L UDPG，15mmol/L 果糖，一定量的酶液。酶的活性测定过程参照Roe[4] 的方法，混合物30℃反应30分钟，2mol/L NaOH溶液终止反应，用间苯二酚测定生成的蔗糖的量。酶活力单位为µmol Suc/g pro.min。

蛋白质含量测定：蛋白质的测定用Bradford方法，以BSA为标准蛋白。

3 结果与分析

3.1 不同浓度蔗糖处理对水稻籽粒中内源糖含量的影响

不同浓度的外源蔗糖处理后籽粒内源蔗糖和总糖含量的变化如图1所示。由图1可知，灌浆初期的离体稻穗于不同浓度的蔗糖溶液中培养24小时后，籽粒中蔗糖含量有不同程度的提高。当用低浓度(50mmol.l-1)蔗糖溶液处理时，内源蔗糖含量较对照略有增加但差异未达到显著水平；当用高浓度(100-150mmol.l-1)蔗糖溶液处理时，内源蔗糖含量较对照极显著增加。外源蔗糖浓度为100 mmol.l-1时，籽粒中蔗糖含量最大，为61.6mg.g-1。内源总糖含量在不同浓度蔗糖处理后，与对照相比均极显著增加，其变化趋势与蔗糖含量变化趋势基本一致。