毕业论文移动版

对拟南芥突变体CS24979、CS879007和SALK-0]0430C以及野生型进行高温胁迫处理，发现在45℃下处理3小时无明显区别，4小时各突变体的存活率明显低于野生型[3]。而过表达atfes1a植株与野生型植株相比，atfes1a对高温更加敏感[4]。

生长素通过调控各种基因的表达从而对植物生长发育进行调控。胚胎发育、维管形成、侧根发育、顶端优势、各种向性反应等,都有生长素介导的调控过程。生长素可以促进侧根的发生发育,介导了侧根发育的每个环节[5-6]。在拟南芥中生长素不敏感的突变体往往表现为根长对高浓度的外源生长素不敏感。OsIAAll 突变体也是这样:在正常条件下, OsIAAll根的长度较野生型稍长;而在外源高浓度的NAA处理下, OsIAAll的根长却大大超过野生型[7]。

前期研究中，发现了一个拟南芥中对脱落酸、氯化钠、聚乙二醇胁迫响应的基因STS1，并且在水稻中找到了STS1的同源基因OsSTSL1（Oryza sativa L. Sensitive To Salt Like 1）和OsSTSL2（Oryza sativa L. Sensitive To Salt Like 2）[8]。通过克隆得到了OsSTSL2基因并且成功构建了该基因的过表达载体，成功转化了拟南芥col-0野生型，且筛选得到了转基因T5代的多个株系。

本文中，选用拟南芥野生型Columbia(Col-0)和OsSTSL2过表达T5代纯合植株表型OsSTSL2-OV-52-3、OsSTSL2-OV-63-20、OsSTSL2-OV-77-5、OsSTSL2-OV-80-14为材料，对其幼苗进行高温胁迫和激素（IAA,NAA）胁迫处理，探究拟南芥野生型和拟南芥过表达植株类型的抗逆性。

2.材料与方法

2.1试验材料

拟南芥生态型：Columbia(Col-0)，

OsSTSL2过表达T5代纯合植株表型：OsSTSL2-OV-52-3、OsSTSL2-OV-63-20、OsSTSL2-OV-77-5、OsSTSL2-OV-80-14

2.2主要试剂及相关配方

MS培养基配方：用MS盐(Sigma) (Murashige&Skoog basal medium vitamins)的配方(1L)：MS盐4.43 g；蔗糖20g；蒸馏水定容至1L，用KOH和HCL调PH值到5.7-5.8（拟南芥）；琼脂粉 (Agar) 8g；121℃灭菌20min。

一次性圆形培养皿，一次性方形培养皿，NAA,IAA试剂，医用胶带，双蒸馏水，一次性枪头等

2.3试验方法

2.3.1培养基的配置

（1）根据MS培养基配方（表1）配置400ML的MS培养基:取500ml干燥的玻璃瓶放于搅拌器上，放入磁珠，用电子天平准确量取MS盐和蔗糖倒入玻璃瓶中，再倒入事先用量筒准确量取的400ml双蒸馏水，开启搅拌器，使MS盐和蔗糖溶解完全。再用10%的KOH和HCL调节PH值到5.7~5.8之间，最后加入用电子天平准确量取的琼脂粉（Agar）。

表1：MS培养基配方源-自/优尔+文,论`文'网]www.youerw.com

试剂 用量

MS盐 1.772g

蔗糖 8g

双蒸馏水 400ml

调PH 5.7~5.8

Agar 3.2g

（2）灭菌：量取500ML双蒸馏水于干燥玻璃瓶中，盖上盖子（不旋紧），用报纸包好一次性枪头，与所配好的培养基（盖子不旋紧）一起放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20min。

（3）超净台紫外灭菌：于超净台中放入烧杯，酒精灯，医用胶带，封口膜，一次性圆形培养皿（20个），打火机，镊子，记号笔等，合上超净台玻璃门，打开紫外灭菌30min（工作期间尽量远离）。灭菌结束后，小幅度打开玻璃门，开启灯光和换气系统，以备使用。

（4）倒置培养基：灭菌后取出一次性枪头，放入烘箱中，干燥后保存。取出双蒸馏水，旋紧瓶盖，冷却后于4℃冰箱中保存。取出培养基，旋紧瓶盖，于常温下冷却至50℃至60℃，用75%的酒精消毒玻璃瓶外表面放入超净台中，将培养基均匀倒入20个圆形培养皿中，冷却后，用封口膜密封并标上日期，注明为MS培养基于4℃冰箱保存。 (责任编辑：qin)