透明质酸发酵液提纯工艺研究(3)
时间:2017-04-28 12:58 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
透明质酸可用作眼科人工晶体植入手术的粘弹剂、骨性关节炎和类风湿性关节炎等关节手术的填充剂，作为媒介在滴眼液中广泛应用，还用于预防术后粘连和促进皮肤伤口的愈合。透明质酸与其它药物反应形成的化合物对药物发挥缓释作用，可达到定向和定时释放的目的。随着医药科技的发展，透明质酸在医药方面的应用将越来越广泛。[4] 1.3 透明质酸的制备方法 1.3.1 从动物组织中提取透明质酸 从动物组织中提取HA常用的原料有鸡冠、脐带、猪、皮等,主要工艺过程包括脱水、磨碎、浸泡、提取、除杂、沉淀和分离。从动物组织提取HA的一般过程如下:先将组织匀浆,再用水和稀盐溶液提取;提取液用氯代十优尔烷基吡啶或十优尔烷基三甲基溴化铵沉淀;将所得的沉淀溶解除渣后,用2-3倍乙醇沉淀即得粗产品。纯化可用乙醇或季按盐反复沉淀进行处理,或采用酶解、超滤、离子交换等技术进一步去杂质及蛋白这种方法的特点是工艺流程简单,收率低,提纯难,成本过高,产品质量差,且难于应用于大规模生产。 1.3.2 发酵法提取透明质酸 早在1937年,Kendall等就发现链球菌可产生HA,许多人对此进行了研究。结果表明,链球菌属的多种细菌都有荚膜,这种荚膜的主要成分就是HA。链球菌的生长过程中英膜的产生有几种不同的情况,有的菌株在整个生长期都有荚膜,有的在对数期的前段产生,后段消失,有的根本就没有荚膜。进一步的研究发现这与所用的菌种是否产生透明质酸酶有关,荚膜的消失是因为被酶降解了。透明质酸酶对HA的产生十分不利。[6] 目前所用的菌种是链球菌属的A群和C群。A群主要是酿脓链球菌等,但由于A群致病性较强,较少使用。C群致病性较弱,多采用此类菌,主要有兽疫链球菌、马链球菌和类马链球菌等。[5] 1.3.3 发酵生产HA分离提纯方法概述 （1）发酵液预处理 预处理是分离纯化前对发酵液进行灭酶、灭菌、除菌的工艺。A．热处理 加热可使透明质酸酶失活,但温度过高会引起糖昔键的降解而使HA分子量 降低,而温度过低则酶不会完全灭活,故选择合适的预处理温度对HA分子量的 影响较大，黄建新[4]将发酵液(HA分子量约2.0x106 Da)用70℃温度热处理lh,冷却至室温，分子量损失率9.6%。 (责任编辑：qin) |