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大肠杆菌由于遗传背景清楚，容易培养，克隆载体与表达载体种类繁多，使之成为人们克隆表达外源基因的主要菌株。大肠杆菌表达系统是目前最常用的外源蛋白表达系统[7]，大肠杆菌BL21 (DE3)菌株是目前最常用的外源基因异源重组表达宿主菌株，其表达载体的构建往往先在DH5a菌株中进行，表达载体构建成功以后再提取质粒转化BL21菌株，并进一步诱导外源基因表达。由于该过程中直接提取构建好的重组质粒转化BL21感受态细胞，因而对感受态细胞的转化效率要求不高，可以采用简单方便的一步法完成。前期研究表明大肠杆菌BL21菌株可以通过一步法实现转化，获得相应的转化子。

大肠杆菌感受态细胞的转化效率会受到诸多条件的影响，比如感受态细胞的保存条件，转化过程中的热击，复苏等，目前已有一些研究报道了这些因素对大肠杆菌感受态转化效率的影响[8-11]。目前，一步法制备的大肠杆菌BL21菌株的感受态细胞及其转化过程中的操作细节对转化效率的影响还不清楚。本论文基于此，对大肠杆菌BL21菌株一步法感受态细胞的转化条件展开了初步研究。

1  材料与方法

1.1  供试菌株和质粒

大肠杆菌BL21（DE3）菌株，用于制备感受态细胞；

pUC19，保存于大肠杆菌DH5a菌株中，氨苄（AMP）抗性；

1.2  主要试剂与培养基配方

LB培养基：蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl10.0g，去离子水1000ml（固体加1.5%的琼脂）。

含Amp的LB固体培养基：将配好的LB固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右，加入Amp储存液，使终浓度为50μg/mL，摇匀后铺板。

TSB：LB pH6.1，10%PEG3350，5%DMSO，10%甘油，10mM MgCl2，10mM MgSO4，高压灭菌。

5*KCM：0.5M KCl，0.15M CaCl2，0.25M MgCl2。配几毫升，过滤除菌，负20℃保存，可反复冻融。

溶液Ⅰ：葡萄糖50mmol/L，Tris-Cl 25mmol/L(Ph8.0)，EDTA10mmol/L(pH8.0)。

溶液Ⅱ：NaOH 0.2mol/L，1%SDS(需现用现配)。

溶液Ⅲ：5mol/L KAc 60mL，冰乙酸11.5Ml，H2O 28.5mL。

TE缓冲液：Tris-Cl 10mmol/L(pH8.0)，EDTA 1mmol/L(Ph8.0)。