位点特异性重组系统与高安全性载体的构建(2)
时间:2020-10-02 15:19 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
2.1 载体的构建 (1)pBIL2 35S GFP载体的构建 用BglⅡ和EcoRⅠ酶切pZA 35S GFP,用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切质粒pBILoxp2,反应体系(100μl)如下: pBILoxp2 40 pZA 35S GFP 20 BamHⅠ 2 BglⅡ 2.5 EcoRⅠ 2 EcoRⅠ 2.5 EcoRⅠButter 10 EcoRⅠ Butter 10 BSA 1 BSA 1 H2O 45 H2O 64 在37℃温浴3小时,用PCR产物纯化试剂盒进行纯化,最后用22μl的去离子水洗脱,加入2.5μl的T4 DNA连接酶buffer和0.5μl T4 DNA连接酶,22℃连接2~3小时, (责任编辑:qin) |