位点特异性重组系统与高安全性载体的构建(2)_毕业论文

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位点特异性重组系统与高安全性载体的构建(2)

2.1 载体的构建

(1)pBIL2 35S GFP载体的构建

用BglⅡ和EcoRⅠ酶切pZA 35S GFP,用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切质粒pBILoxp2,反应体系(100μl)如下:

pBILoxp2      40                         pZA 35S GFP    20

BamHⅠ       2                            BglⅡ        2.5

EcoRⅠ        2                            EcoRⅠ       2.5

EcoRⅠButter  10                        EcoRⅠ Butter   10

BSA           1                            BSA           1

H2O           45                            H2O          64

在37℃温浴3小时,用PCR产物纯化试剂盒进行纯化,最后用22μl的去离子水洗脱,加入2.5μl的T4 DNA连接酶buffer和0.5μl T4 DNA连接酶,22℃连接2~3小时,

(责任编辑:qin)