反硝化细菌的筛选及鉴定(4)_毕业论文

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反硝化细菌的筛选及鉴定(4)

Pai[21]等在同一个好氧反应容器中加入好氧反硝化细菌T6和硝化污泥,在硝态氮的进水浓度为250mg/L时,得到总氮去除负荷最大可达360mg[N]/(g[MLVSS]·d)。因而可将硝化菌和反硝化菌在单污泥或生物膜系统中混合培养,在对运行条件的合适控制后,就能在同一个反应容器中实现硝化和反硝化的同步进行。Gupta[22]等在处理不同浓度的生活污水时利用含有Thiosphaera pantotropha的生物转盘,在有机负荷(以CODcr计)和氨氮负荷(以N计)分别为6.9~20.7和0.69~2.09g/(m2·d)的情况下,CODcr和氨氮去除速率高达5.8~14.1和0.41~1.1g/(m2·d),同时总氮去除率达20%~68%。

好氧反硝化的研究虽然在国内还处于起步阶段,但是由于其比传统生物脱氮具有优势,必将成为未来废水生物脱氮的重要途径之一。

1.5 好氧反硝化菌的筛选方法

好氧反硝化菌对生长环境并没有什么特殊要求,相同的环境中有许多的菌种可与其竞争,因此,筛选效率并不是很高。目前,已公布的一些筛选方法主要有几种:

1 间歇曝气法

李丛娜等[25]采用间歇曝气对污水处理中的活性污泥进行驯化并分离出好氧反硝化细菌。

2 使用选择性培养基或呼吸抑制剂

孔庆鑫等[26]设计了利用氰化钾(KCN)选择培养基来筛选好氧反硝化细菌的方法。

3 使用酸碱指示剂

在硝酸盐或亚硝酸盐培养基中加入溴百里酚蓝(BTB) [27],酸性条件下BTB指示剂显黄绿色,当好氧反硝化菌的反硝化作用消耗了硝酸盐或亚硝酸盐后,pH上升,指示剂显蓝色,在筛选平板上会出现蓝色克隆或晕环。

1.6 细菌分类鉴定方法

1.6.1  传统的鉴定方法

传统的细菌鉴定方法主要是依据细菌的形态学、生理学和生态学等特征进行鉴定细菌。主要方法分为:(1)对细菌在固体培养基上的生长形态、大小、颜色等菌落的宏观形态学进行观察,通过显微镜对细菌的个体形态学观察并辅以生化实验的方法对细菌的分类进行鉴定;(2)依据细菌在自然界中的存在和与其他生物的关系,如与自然界其他生物的共生、寄生关系,致病性,对噬菌体的敏感性等作为分类的参考依据;(3)依据细菌具有特异性的抗原结构,与特定的抗体能专一反应的特点进行鉴定。

传统的鉴定方法具有所需试剂较多、步骤复杂、操作时间长、特异性不强等缺点,但仍然是一种研究和认识微生物的重要方法。在自然界中有许多的菌种在分离培养时,较难培养。在培养时,难以避免菌株的富集和衰减,这就人为的造成了原始菌群的形态学发生了变化,对研究结果造成较大偏差[28]。论文网

1.6.2  化学方法鉴定

主要通过对生物标志物进行检测,如脂质、醌类、脂多糖、胞壁酸和蛋白质等化学成分进行化学分析比较,以不同种类细菌在化学成分上的差异性及规律性,作为细菌分类鉴定的依据[29]。

1.6.3 分子生物学鉴定

    分子生物学的鉴定方法目前主要是核酸检测技术,包括基因测序、基因探针技术、PCR技术、指纹图谱技术、GC含量测定等方法。

   16S rRNA鉴定:细菌中的 16S rRNA序列,既含有高度保守的序列区域,又有中度保守和高度变化的序列区域,因而它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究。其相对分子量大小适中,便于序列分析。16s rRNA序列分析技术就是从微生物样本中提取16s rRNA的基因片段,通过一系列分子生物学技术,获得 16s rRNA的序列信息,再与 16s rRNA数据库中的序列数据或其它数据进行比较,确定其在进化树中的位置,从而鉴定样本中的微生物种类。 (责任编辑:qin)