淮安市野生鲫鱼染色体倍性分析(2)_毕业论文

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淮安市野生鲫鱼染色体倍性分析(2)

    鲫鱼分布广泛,全国各地水域常年均有生产,以2~4月份和8~12月份的鲫鱼最肥美,为我国重要食用鱼类之一。由于鲫鱼食性杂,适应能力和繁殖能力都非常强等,所以几乎遍布于全国各地的江河湖泊、池塘河沟和水库等各类水体中。

    除了分布广泛,鲫鱼还具有种类多样性高、生存适应能力强和生殖方式多样(可进行雌核发育生殖和正常的两性生殖)等特点,而渐渐成为研究进化遗传学和发育遗传学的研究对象被研究者所重视。在长期生态适应生态环境的过程中出现了许多地方性不同的种群,如己报道的雌核发育的滇池高背鲫、贵州普安鲫、黑龙江方正银鲫、江西彭泽鲫及有繁殖的湖南红鲫、从日本引种驯化的白鲫、杂交选育的湘鲫和松浦鲫等均进行过核型研究[2]。人们对鲫鱼染色体组型进行了大量研究之后,一般认为其二倍体染色体数目为100条,而染色体数目高达150条的称三倍体。生物所有历史都记载在染色体上,分析鱼类染色体核型对于研究鱼类的遗传变异、分类地位、系统演化、性别决定、杂交育种均具有重要意义[3]。本实验就淮安地区野生鲫鱼染色体组型分析,探究淮安野生鲫鱼染色体为二倍体、三倍体或两者共存。

2  材料与方法

2.1  材料

    实验分别取用淮安四个地区-经济开发区沟渠、东部废黄河、洪泽湖、城南的河内野生鲫鱼(见表1),共16尾,其体重为80-120g,体长为15-23cm,活鱼用桶装回学院水产养殖室供氧养殖1周后用于染色体核型分析。

实验方法

2.2.1  前处理

    用注射器向鲫鱼腹腔内注射剂量10 ug/g PHA溶液,实验室饲养12 h后,在同一部位注射秋水仙素溶液,剂量2 ug/g体重。注射时注射器针头刚好插入鱼的腹腔内,不应过深,以免刺伤鱼内脏,造成鱼死亡。注射秋水仙素4h后,剪断鳃血管,放血30min。文献综述

2.2.2  制备肾细胞悬液

    先将鱼解剖,取鱼的头肾,用0.7%的生理盐水清洗2-3遍,然后置于盛有少量生理盐水的培养皿中,头肾组织用小剪刀充分剪碎,过滤除去组织块,滤液用移液枪充分吹打数次,释放出细胞,再移入离心管中,加入适量0.7%的生理盐水制成细胞悬液。

2.2.3  低渗处理

    先将细胞悬液吸入5 ml离心管中,离心机1000 r/min离心时间5 min,重复两次,然后去掉上清液,取肾细胞,加入0.075mol/L KCl溶液,将离心管放置在25℃水浴锅低渗45min。

2.2.4  固定

    低渗后加入新制备的卡诺氏固定液(V(甲醇):V(冰醋酸)=3:1)室温固定30 min,每隔15分钟吸掉固定液,再加入固定液重复固定,然后用离心机1 000 r/min离心5 min,去掉上清液,取细胞沉淀,加入少量适量现配固定液,将细胞吹打均匀。

2.2.5  滴片

    轻轻晃动离心管底部,弄成悬液,用吸管吸取细胞悬液,站在高空往约45°倾斜的预冻玻片上滴2-3滴,轻轻吹匀,静置干燥。

(责任编辑:qin)