酵母Hsp70蛋白的诱导表达(2)
时间:2017-05-23 19:35 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
本实验在安琪酵母中提取酵母，进行活化，初筛、复筛、鉴定酵母和扩大培养，并测其生长曲线，并用不同浓度的H2O2 溶液刺激，利用凝胶电泳进行初步提取。 1. 材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 菌株 本实验所用的安琪甜酒曲购于新疆伊宁市安琪酵母有限公司，其他实验药品均来自周口师范学院生命科学系分子生物学实验室。 1.1.2 实验用溶液的配置 初筛（复筛）选培养基(定容至 500 mL )： 成分 质量/g 酵母膏 5 蛋白胨 10 琼脂粉 10 葡萄糖 10 扩大培养基(定容至 300 mL )： 成分 质量/g 酵母膏 3 蛋白胨 6 葡萄糖 6 破壁缓冲液：0.1 mol/L 磷酸缓冲液（Ph 7.4）。称取NaH2PO4 3.12g 溶于100mL 水中；称取 Na2HPO4 35.8g 溶于500 mL 水中；取95 mL NaH2PO4 溶液，405 mL Na2HPO4溶液混合在一起，定容至1000 mL，4℃冰箱保存。 凝胶贮备液：丙烯酰胺（Acr）29.2 g ,亚甲基双丙烯酰胺（Bis）0.8 g，加重蒸水至100 mL。外包锡纸 4℃ 冰箱保存，30 天以内使用。 分离胶缓冲液：1.5 mol/L Tris-HCL，pH 8.8。18.15 g Tris, 加约 80 mL重蒸水,用 1 moL/L HCL 调 pH 到 8.8，用重蒸水稀释至最终体积为100 mL ,4℃ 冰箱保存。 浓缩胶缓冲液：0.5 moL/L Tris-HCL，pH 6.8 。6 g Tris，加约60 mL 重蒸水，用1 moL/L HCL 调 pH 到6.8，用重蒸水稀释至最终体积为100 mL ,4℃ 冰箱保存。 10% SDS（十二烷基磺酸钠），室温保存。10 g SDS溶解在100 g 水中在37℃下水浴 1 h 进行溶解。 2倍还原缓冲液： 成分 体积 / mL 0.5 mol/L Tris-HCl，pH6.8 2.5 甘油 2.0 质量浓度10%SDS 4.0 质量浓度0.1%溴酚蓝 0.5 β-巯基乙醇 1.0 总体积 10 电极缓冲液(定容至 1000 mL，pH 8.3，4℃ 冰箱保存 )： (责任编辑：qin) |