降解羽毛蛋白菌株的筛选及初步鉴定(3)_毕业论文

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降解羽毛蛋白菌株的筛选及初步鉴定(3)

南京化学试剂有限公司

NaNO2 连云港市化学试剂厂

H2O2 上海桃浦化工厂

结晶紫 中国医药(集团)上海化学试剂公司

乙醇 国药集团化学试剂有限公司

草酸铵 上海化学试剂总厂所属上海试剂一厂

上海化学试剂总厂所属上海试剂四厂

碘化钾 中国医药(集团)上海化学试剂公司

香柏油 上海标本模型厂

葡萄糖 国药集团化学试剂有限公司

乳糖 上海化学试剂总厂所属上海试剂二厂

蔗糖 SCRC国药集团化学试剂有限公司

溴百里酚蓝 上海试剂三厂

氨水 上海久亿化学试剂有限公司

2.4 培养基与材料

淀粉筛选培养基:淀粉20g,蛋白胨10g,2.5g NaCl,琼脂10g,自来水1000mL,pH自然。

斜面种子培养基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,5g NaCl,琼脂15-20g,自来水1000mL,pH为7.2-7.4。

蛋白胨液体培养基(用作吲哚实验):蛋白胨10g,5g NaCl,自来水1000mL,pH为7.2-7.4,121℃灭菌20min。

葡萄糖蛋白胨培养基(VP与MR试验):蛋白胨5g,葡萄糖5g,5g NaCl,自来水1000mL,pH为7.2-7.4,121℃灭菌20min。

糖发酵培养基(作糖酵解试验):蛋白胨2g,5g NaCl,0.2g K2HPO4 ,1%溴麝香草酚蓝水溶液3mL,待试糖10g(一般糖或醇按1%量加入,而半乳糖、乳糖按1.5%的量加入),自来水1000mL,pH为7.2-7.4。

酪氨酸平板(作酪氨酸水解试验):取L-酪氨酸0.5g悬浮在10mL蒸馏水中,20分钟灭菌,然后放于100mL无菌的营养琼脂混合,就成酪氨酸水解平板。

酪素平板(作酪素水解试验):取5g脱脂奶粉加入50mL的蒸馏水中,另外称取1.5g琼脂溶解于50mL蒸馏水中,将两液分开灭菌。待冷却至45-50℃时,把两液混匀倒平板,就成牛奶平板。

西蒙斯氏柠檬酸盐培养液(作柠檬酸盐利用试验):柠檬酸钠2g,5g NaCl,0.2g MgSO4·7H2O,1g K2HPO4·3H2O,1g (NH4)2HPO4,1%溴麝香草酚蓝水溶液10mL,琼脂15-20g,自来水1000mL,pH 7.0,121℃灭菌20min。文献综述

淀粉牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:用可溶性淀粉2g,牛肉膏3g,蛋白胨10g,5g NaCl,琼脂15-20g,蒸馏水1000mL,pH为7.2-7.4。

明胶培养基(做明胶液化试验用):牛肉膏3g,蛋白胨10g,明胶12g,蒸馏水1000mL,pH为7.0。

高盐培养基(做耐盐试验):牛肉膏3g,蛋白胨10g,2g、5g、7g的NaCl ,琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,pH为7.2-7.4。

半固体培养基(作运动性实验):琼脂含量为0.5%,其他组分的比例按牛肉膏蛋白胨培养基来配制。

3.实验方法

3.1土壤悬液的制备与稀释

各称5g土壤样品装于装有45mL无菌水的100mL锥形瓶中,放入玻璃珠与土壤悬液,一起振荡,制成土壤悬液。置100℃沸水浴10min,杀死非芽孢杆菌。再静置5min。[8]吸取上清液0.5mL加到含有49.5mL无菌水的三角瓶中,配成10-2g/mL的土壤悬液,并进一步稀释至10-3g/mL、10-4g/mL和10-5g/mL,共四个浓度梯度[10]。

3.2溶液配制

(1) 硫酸羟胺溶液 C[(NH2OH)2SO4]=2mol/L

(2) 氢氧化钠溶液 C(NaOH)=5mol/L

(3) 盐酸溶液 C(HCl)=2.5mol/L       C(HCl)=0.1mol/L(由于配制氯化铁溶液) (责任编辑:qin)