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目前对于昆虫视蛋白的研究主要集中在鳞翅目，如小地老虎、烟草天蛾、棉铃虫等，并且已经克隆得到它们的视蛋白基因。而对于鞘翅目昆虫的研究现在仍较少，赤拟谷盗是较为理想的实验材料。本研究使用RACE技术首次克隆得到了赤拟谷盗UV视蛋白基因的全序列，旨在了解UV视蛋白的分子进化，为深入研究视蛋白在储粮害虫趋光行为中所发挥的作用奠定基础，不仅在理论上具有重要的意义，在实际的应用中也有潜在价值，可能为研发出新型选择性害虫诱杀剂或测报用光源，开发出调控昆虫视觉行为的刺激物或抑制物，使灯光或光学调控害虫技术应用于虫害的生物防治工作起到重要作用。

1。材料与方法

1。1 供试昆虫

试验用赤拟谷盗置于29摄氏度、相对湿度为70%的恒温恒湿培养箱内，在小麦全麦面粉中进行繁殖扩群。根据赤拟谷盗的繁殖和生长发育时间，定期筛选和收集成虫。所用的成虫阶段试虫在蛹期就鉴别雌雄并分开饲养分别收集羽化后的赤拟谷盗成虫。将所有试虫的头部在体视显微镜下摘取，材料收集后分装在细胞冻存管中放入液氮保存备用。

1。2 赤拟谷盗头部RNA的提取

1) 取50-100mg头部组织直接放入液氮预冷的研钵中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末状，转入加有1ml细胞裂解缓冲液（1% SDS，50 mmol/L Tris-HCl， 25 mmol/L NaCl，25 mmol/L EDTA）的离心管中；

2) 在EP管中加入0。2ml的氯仿，上下震荡混匀，室温下静置5min ；

3) 将EP管放入高速冷冻离心机中，4℃ ， 12000rmp 离心 15min，取上清；

4) 将约500ul的上清转移到离心柱中，加入250ul的无水乙醇，充分混匀，4 ℃ 12000rmp离心1min ，弃掉收集管中的废液；

5) 加入 500ulRNA漂洗液，静止1min，12000rmp离心1min ，弃掉收集管中的废液；

6) 将离心柱转移到无RNAse离心管中，加入30-50ulDEPC处理的水12000rmp离心1min。

7) 收集提取的RNA放入-20℃的冰箱中备用。

1。3 cDNA第一条链的合成

1) 在灭菌的DEPC水处理后的EP管中分别加入1ul的3-RACEP1（0。5ug/ul）和2ul的RNA模板，用水补充至体积为13ul；

2) 将步骤1中的加完样的EP管放入70℃的水浴中5min，取出放入冰浴中冷却5min；

3) 在上面的EP管中根据下表依次分别加入这些试剂

成分 体积(μL)

5×第一链缓冲液 4

dNTP 2

核酶抑制剂 0。5

MMLV 0。5

加水至 20

4) 混匀EP管中的样，离心后，放置42℃ 水浴锅中60min；

5) 将EP管于95℃下加热5min，灭活反转录酶；

6) -20℃保存cDNA，备用。

1。4 TDT加尾反应

在微量离心管中配制下列反应液，全量为50ul，37℃下反应30min

成分 体积（ul）

5X TDT buffer 10

0。1% BSA 5

10mM DGTP 2。5

TDT (责任编辑：qin)