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1。2。2 数据处理

本实验中通过比较水稻突变体植株的相对株高(relative plant height, RPH)与相对根长(relative root length, RRL)来判断突变体的耐镉性。RPH是对照组株高与处理组株高之差与对照组株高的比值，RRL是对照组的根长与处理组根长之差与对照组根长之比的比值，计算RPH和RRL时使用所采集数据的平均值[15]。将测定的相对根长和相对株高数据结合Cd处理前后的表型差异，选择相对株高和相对根长值显著低于对照粳稻中花11的突变体, 得到耐镉和镉敏感的水稻突变体。

使用SPSS 20。0进行数据处理，数据处理方式为：单因素方差分析和Ducan多重比较。

1。2。3 突变体的种植

选出颗粒饱满的水稻种子，浸泡12h后倒至垫有湿润滤纸的平板上进行约3天的催芽，种子发芽后，种植于塑料网上，漂浮在水培箱中后，置于光照培养箱中培养。培养约7d左右，提取水稻突变体叶片中的DNA。

1。2。4 水稻叶片DNA的抽提

实验中利用CTAB法提取水稻叶片中DNA[16]，方法如下：(1)称取约0。2g叶片样品，在研钵中加入液氮研磨样品叶，将研磨后的叶片转移到1。5ml或者2ml的离心管中，并加入CTAB（CTAB溶液使用时当场加入β-巯基乙醇）；(2)然后将装有样品的离心管放在65℃的水浴锅中水浴60min，每隔10分钟取出样品摇匀；(3)室温下12000r/min离心10min；(4)离心后取上清液，并加入氯仿和Tris-平衡酚（醇：酚体积比为1: 1），混合均勻后室温下12000r/min离心10min，取上清液；(5)重复步骤(3)的洗脱过程；(6)向第二次洗脱后的上清液中，加入等体积的异戊醇，混匀后室温下12000r/min离心5min，弃上清；(7)加入70%乙醇后，12000r/min离心1min洗涤2遍；(8)等乙醇挥发干,加入一定量的双蒸水溶解DNA；(9)提取产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测DNA提取情况；(9)-20℃保存提取后的DNA样品。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

1。2。5突变体DNA的PCR检测

PCR扩增体系为：DNA模版1。0 μl；20 μl:13 μl水，2。0 μl 浓度2 mmol/L的dNTP，2。0μl 10×Buffer，1。0 μl Taq DNA聚合酶，上游引物0。5 μl，下游引物0。5 μl。PCR反应程序为：预变性94 ℃，3 min;变性94 ℃，30s；半定量引物及T-DNA鉴定引物退火温度分别为55和72 ℃，循环30次。