毕业论文移动版

主要试剂：胶回收试剂盒购自OMEGA 公司；PrimeScript®RT试剂盒购自日本TaKaRa公司；RNA 抽提Trizol购自美国 Invitrogen 公司；DNA ladder 2000、PCR引物由上海英骏公司完成；葡萄糖分析试剂盒、牛血清蛋白（BSA）、淀粉转葡萄糖苷酶、蒽酮（分析纯）、海藻糖均购自Sigma 公司；BCA 蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天公司；HiFi taq DNA聚合酶购自北京全式金生物技术有限公司；引物送至上海Invitrogen 公司合成；荧光定量染料为Bio-Rad公司专用试剂。

主要仪器：CFX96 型PCR仪，美国BIO-RAD公司；NanoDrop™ 2000型微量测定分光光度计，美国Thermo Scientific 公司；YC-D209型光照培养箱，中国亚都公司。

1。2  实验方法 

1。2。1 褐飞虱海藻糖、葡萄糖和糖原含量的测定

 分别取30头取食TN-1、中浙优1号、IR56水稻7 d的褐飞虱，冰浴PBS研磨；然后4℃、1000×g离心20 min；上清用于海藻糖含量的测定。将取食TN-1、中浙优1号、IR56水稻7 d的褐飞虱的上清液分成3组，每组做3个以上重复，相同处理的取食TN-1水稻的褐飞虱上清液作为对照，采用郭永霞（2002）的方法提取海藻糖。将40 mmol/L的海藻糖溶液用PBS稀释为1。6、0。8、0。6、0。4、0。2、0。1、0。05 mmol/L的标准液，制作标准曲线；取10 μL标准液或海藻糖提取液，加入 10 μL 1％H2SO4，90℃水浴10 min，冰水浴3 min；再加入10 μL 30％KOH，90℃水浴10 min，冰水浴3 min；然后加入200 μL显影剂（0。02 g蒽酮加10 mL 80% H2SO4），90℃水浴 10 min，冰浴冷却，测A630；最后计算褐飞虱海藻糖的含量。来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

葡萄糖含量的测定：取50 μL上述1000×g离心上清液，加入100 μL葡萄糖分析试剂，37℃水浴30 min；加入12 mol/LH2SO4终止反应，测A540；标准曲线制作同上；最后进行褐飞虱体内葡萄糖含量的计算。

糖原含量的测定：取100 μL上述1000×g离心上清液，加入淀粉转葡萄糖苷酶20 μL 0。1U/μL，40℃水浴4 h；以相同处理不加淀粉转葡萄糖苷酶作为标准对照；取待测样品50 μL，加入100 μL葡萄糖分析试剂，37℃水浴30 min；加入100 μL12 mol/L的H2SO4终止反应，测A540；标准曲线的制作同1。2。1；最后计算褐飞虱体内糖原的含量。