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1 材料与方法

1。1供试虫源

    病原：从北京天元慧通科技有限公司购买蝗虫微孢子虫悬浮剂，将其配置成三个不同的浓度，分别为：2×107个/mL、5×106个/mL、1。25×106个/mL，置于4℃冰箱中保存。

饲养：东亚飞蝗虫卵由杭州师范大学生命科学学院动物重点实验室提供。在室内或室外自然条件下，置于底层铺有15cm厚沙土的养虫笼中（50 cm×50 cm×50 cm），以新鲜干净的小麦苗饲养蝗蝻至所需虫龄，作为对照组试虫。取刚羽化的健康雌成虫，饥饿处理12小时后，以浸泡法（微孢子虫浓度为分别为：2×107个/mL、5×106个/mL、1。25×106个/mL）处理新鲜小麦苗后饲喂24小时后，再以未经处理的新鲜的小麦苗持续饲养，作为实验处理组。

1。2卵黄原蛋白和卵黄原蛋白受体基因表达情况来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

1。2。1主要耗材和试剂

枪头，EP管：购自江苏海门市耀华玻璃仪器厂。

Trizol（Invitrogen）试剂：购自上海禾晟生化科技有限公司。

1。2。2 主要实验仪器设备

移液枪：德国Eppendorf公司生产，规格为2。5 μL，10 μL，20μL ，100μL ，200 μL，1000 μL。

数显恒温水浴锅：常州国华电器有限公司HH-8型数显恒温水浴锅。

Sorvall Primo R台式高速离心机：美国Thermo公司。

荧光定量PCR仪：美国Bio-Rad 公司C1000TM Thermal Cycler型。

（Nikon）SMZ800型生物解剖镜：日本尼康公司。

超净工作台：上海博迅实业有限公司医疗设备厂。

制冰机：GRANT XB型。

1。2。3 实验方法

1。2。3。1卵巢样品的制备

在冰台上解剖取东亚飞蝗雌虫腹部，分离并收集卵巢，快速转移到冰浴的进口1。5mLEP管中，3头成虫为一个样本，各发育时期3个样本，于-80℃冰箱中保存。

1。2。3。2东亚飞蝗卵黄原蛋白基因（Vg）和卵黄原蛋白受体基因（VgR）表达水平的测定

卵黄原蛋白基因（Vg）和卵黄原蛋白受体基因（VgR）表达水平的检测采用荧光定量PCR的方法。利用Primer 5。0和DNA Star软件进行荧光定量引物的设计，然后由上海INVITROGEN生物工程有限公司负责合成。对引物检测后，建立合适的Real-Time PCR扩增体系及反应条件，测定其卵黄原蛋白和卵黄原蛋白基因的表达水平。