猪链球菌耐药性分析(2)
时间:2021-12-16 17:52 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
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1。2方法 1。2。1菌种复苏 将这7种猪链球菌划线接种到羊血琼脂培养基上，37℃培养过夜。观察到培养基上有菌落长成后，从中筛选具备典型特性的菌落接种于THB培养液中37℃振荡培养过夜，将液体培养物做gdh基因的PCR检测。PCR鉴定为阳性的即为猪链球菌。这一步骤为了确证冻存菌株没有因反复冻融而死亡。来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766* 1。2。2 PCR 体系：25 μL ①10×PCR缓冲液 2。5μL ②dNTP 0。5μL ③gdh上下游引物 各1μL ④TaqDNA聚合酶 0。5μL ⑤模板 1μL ⑥ddH2O 18。5μL 反应条件为：94℃预变性10min；94℃1min；56℃30s；72℃1min；30个循环。延伸温度为72℃,10min左右，设HA9801为阴性对照。 1。2。3药敏试验 吸取200μL分离菌株菌液均匀涂布在M-H培养基上，用无菌镊子取上述这20种药敏纸片均匀放置在培养基表面并轻轻按压，使其紧贴。置培养皿于37℃恒温培养箱中培养24h。之后测定各药物的抑菌环直径。猪链球菌对各种药物敏感程度的判断标准[3 (责任编辑：qin) |