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最后，再各自分别装进各种不同型号的三角瓶中，注意，分装时，PDA高度不要超过三角瓶高度一半，分装好后，再一起放入水浴锅中进行灭菌。

1。1。3 试剂与仪器

   仪器：超净工作台，恒温培养箱，过滤器， pH计，微量注射器，96孔板，水浴灭菌锅，硅胶G板，玻璃平板，紫外线灭菌操作台超速离心机，。

试剂： MTT试剂，乙酸乙酯，甲醇，75%的乙醇，次氯酸钠，PDA培养基

1。2实验方法

1。2。1内生真菌的分离

先将有病害的植物扔去，剩下的健康的植物样本用自来水冲洗干净，晾干后。开始进行操作。用剪刀分别剪下它的根茎叶。

先用小刻刀在叶片的左右上下和中间分别划下1cm³的五小块，再在茎和根上分别剪两块1cm的小块。注意，剪根时，要保留它的树皮，而不是根部。然后放进浓度75%的乙醇溶液中进行1min，期间要不停摇晃，然后小心倒去乙醇溶液。接着再放进次氯酸钠溶液中浸泡10min，注意要1min晃动一次。最后放进无菌水中清洗三次，每次10min。注意每个步骤进行时都要不停晃动，晃动间隔为1min一次。

1。2。2平板接种及室温培养

倒平板方法：用已灭菌的，且温度已降到50℃左右的PDA。具体操作在无菌操作箱中进行。首先戴上手套，点燃酒精灯，右手拿起打开的锥形瓶，轻轻拔开盖。让瓶口尽量对着火焰，左手拿起平板，靠着酒精灯，平板微微打开一条缝，将瓶口对着平板缝，快速且稳当倒入PDA，注意观察倒入的量，要覆盖全部底部，但也不要过多，最好在15ml左右。倒好后，轻轻的在台面上晃动平板，让PDA分布的更加匀称，然后放在水平的台面上，等待冷却定型。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

接种同样要在无菌操作台中进行，要提前半小时打开紫外线灯。 进行操作时，关闭紫外线灯，打开白炽灯。大点的平板，可以分别放五个部分，上下左右和中间。首先给镊子灭菌。左手拿起离心管，打开瓶盖，夹起样品，放在平板的相对位置上，如果叶子不慎掉落，就不要继续使用。夹取样品时要迅速和准确，一次到位。镊子每夹一次样品就要在酒精灯上消毒一次。

在此之前，要根据自己的样品需求，在平板底部先标上日期，姓名，样品名称，样品部位名称，同一部位不同编号。因为平板大小有限，所以，姓名，植物名称等要缩写。接种好的平板在室温下培养一周。