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第二批实验材料在2015年4月13号取自杭州师范大学下沙校区内西林广场后方的樱花林中生长健壮的无病虫害的成熟樱花植株（编号为5，对应图1中E）上的嫩芽（图1中的F），利用小刀从芽底部取下，小心保存。5种品种的检索表如下。

图1   不同品种樱花品种母本材料

注：A。为1号樱花母本；B。为2号樱花母本；C。为3号樱花母本；D。为4号樱花母本；E。为5号樱花母本；F。为由5号樱花母本上采集的嫩芽外植体。

樱花品种检索表

1。 枝条下垂1。 垂樱

1。 枝条不下垂。

  2。 花梗及萼片被柔毛，萼筒管状，萼片边缘有齿，花柱有毛2。 东京樱花

  2。 花梗及萼片无毛，萼筒钟状，萼片全缘，花柱无毛3。 日本晚樱

根据检索表，1号和2号品种应该属于东京樱花，3号品种和5号品种属于日本晚樱，4号品种为垂樱。

1。1。1 外植体消毒

先用清水轻轻洗去叶片表面的灰尘等脏东西，再将幼芽外的苞片剥离干净，然后在超净台上，用75%的酒精浸泡30s以及0。1%升汞浸泡5min进行表面消毒，最后用无菌水冲洗四次，保证芽表面无升汞残留，放在无菌滤纸上吸干水分。[3]

1。2  丛生芽的诱导 

1。2。1培养基

诱芽培养基：MS + 1。0mg·L-1 BA+ 0。1 mg·L-1 NAA

另附加蔗糖20g/L、琼脂6g/L、pH 值调至6。0±0。2

1。2。2接种

在灭完菌的超净台上，取出已经处理好的嫩芽，规范操作接种于诱导丛生芽的培养基中，每瓶接3-4个芽。每个品种接25瓶，置于温度为25±2℃的培养室中见光培养，每天光照14h，光照强度1500~2000lx，定期观察五个品种的芽的生长情况，测量相应苗高，侧芽数等，并做好相应的记录。

1。2。2 继代培养

1。2。2。1继代培养基

培养基配方同起始培养基。

1。2。2。2继代诱导培养

在灭完菌的超净台上，取培养了经过一个月初代培养的嫩芽，规范操作转接于继代培养基中，同时切除幼苗底部愈伤组织的褐化部分，摘取老叶及枯黄叶片。每瓶接3-4个芽，置于温度为25±2℃的培养室中见光培养，每天光照14h，光照强度1500~2000lx，定期观察五个品种的芽的生长情况，测量相应苗高，侧芽数等，并做好相应的记录。之后每个月都进行继代培养，直至幼苗株高达到5-10cm。文献综述

1。3  幼苗生根的诱导

1。3。1 生根培养基

生根培养基：1/2 MS + 0。5 mg·L-1 NAA

1/2 MS + 0。25 mg·L-1 NAA

基本营养：蔗糖20 g/L、琼脂6 g/L、MS粉4。74 g/L、PH 6。0±0。2

激素组合（两个梯度）：NAA 1 ml/L

NAA 0。5 ml/L

1。3。2接种与观察

在灭完菌的超净台上，取培养了经过一段时间继代培养的幼苗，规范操作转接于生根培养基中，同时切除幼苗底部愈伤组织的褐化部分，摘取老叶及枯黄叶片。每瓶接2-3株，置于温度为25±2℃的培养室中见光培养，每天光照14h，光照强度1500~2000lx，定期观察五个品种的幼苗的生长情况，测量相应苗高，侧芽数等，并做好相应的记录，直至生根。对比两种不同激素处理的幼苗的生根情况。

1。4 组培苗的移栽

1。4。1移栽苗的选择

选取生长健壮，根系发达的生根苗为材料。

1。4。2移栽

在移栽进营养土（泥炭：珍珠岩：蛭石= 3：1：1）之前，先对幼苗进行一个星期的炼苗。每天打开一点盖子，帮助幼苗适应外界环境，直至完全打开盖子。之后将幼苗小心取出，洗净根部培养基，以5-8cm间距栽培与营养土中，浇透水后置于温室内，定期浇水观察。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766- (责任编辑：qin)