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4）继续加入0。5个Buffer DE-A体积的Buffer DE-B，颠倒混匀。

5）将上一步骤离心管中的混合液转移到DNA吸附柱中（事先将吸附柱置于2mL离心管中），12000rpm离心1分钟，弃除滤液。

6）将吸附柱重新置回2mL离心管并加入500uL Buffer W1，12000rpm离心30秒后弃除滤液。

7）将吸附柱重新置回2mL离心管并加入700uL 已提前加入无水乙醇的Buffer W2，12000rpm离心30秒后弃除滤液。将该步骤再重复进行一次后12000rpm离心1分钟。

8）将吸附柱重新置回2mL离心管，12000rpm离心1分钟。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

9） 将吸附柱置于已灭过菌的1。5mL离心管中，在制备膜中央加入25uL Eluent（洗脱液），室温条件下静置1分钟，12000rpm离心1分钟洗脱DNA[12]。

1。2。4 重组克隆质粒pEASY-E2-Au的构建

在微型离心管中依次将切胶回收得到的DNA与线性化的pEASY-E2按照7∶1的比例加入，轻轻混合均匀，室温条件下反应10分钟。反应结束后之后，将离心管置于冰上，即得到重组质粒pEASY-E2-Au。