腐胺对盐胁迫下大豆幼苗叶片渗调物质含量的影响(3)
时间:2017-06-09 20:44 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
准确称取上述材料各0.5g装入烧杯中，加无离子水20mL，为使叶片完全浸入水中，可用真空泵抽气20min，于室温下浸泡5小时。然后用电导仪测其每组的电导率（注：再测一组无离子水的电导率）。结果计算： 相对电解质渗透率（%）=（处理浸提液电导率值/对照浸提液电导率值）×100 1.4.3叶绿素含量测定 采用分光光度法测叶绿素含量[15]。具体方法如下： 称取剪碎的各组新鲜样品0.5g，分别放入研钵中，并加少量石英砂和3mL 80%丙酮，迅速研磨成匀浆，未研碎的绿色部分再次加入2mL 80%的丙酮继续研磨，直至残渣不显绿色为止。 取滤纸一张。置于漏斗中，用80%丙酮润湿，沿玻璃棒把提取液倒入漏斗过滤到25mL的容量瓶中，用少量的80%丙酮冲洗研钵，研棒及残渣数次，洗液倒入漏斗，用滴管吸取80%丙酮，将滤纸上的叶绿素全部洗入容量瓶中，直至滤纸和残渣无绿色为止，最后用无水乙醇定容到25mL。 把叶绿素提取液摇匀后倒入比色杯中，以80%丙酮为对照，测652nm处的吸光值（OD）。计算结果： 叶绿素总量（mg/g)=(D652/34.5)×（V/W）×1000 式中V为提取液体积（L) W为材料鲜重（g) 1.4.4可溶性蛋白含量测定 采用考马斯亮蓝G-250染色法[16]。具体方法如下： 取6支试管，按表1配置0~100ug/mL牛血清蛋白标准液各5mL.准确吸取所配的各管溶液0.1mL,分别放入10mL具塞试管中，加入5mL考马斯亮蓝G-250试剂，盖塞，反转混合数次，放置2min后，测在595nm处的吸光值。以蛋白质标准液浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 表 1配置0~100ug/mL血清蛋白液 试剂 管号 1 2 3 4 5 6 1000ug/mL牛血清蛋白量/mL 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水量/ml 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 蛋白质含量/ug 0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0 称取大豆幼苗0.5g，置于预冷的研钵中剪碎，加入5mL预冷的0.1mol/L (PH7.0)的磷酸缓冲液（分几次加入）。石英砂少许，在冰浴下研磨成匀浆，4000r/min离心10min(2~4℃),所得上清液即为样品提取液。吸取样品提取液0.1mL，按上述方法与考马斯亮蓝G-250试剂反应，测得溶液在595nm处的吸光值，根据标准曲线查出相应的蛋白质浓度。结果计算： 样品蛋白质含量（mg/g FW）=（C×V）/（W×1000） 式中C为查标准曲线所得样品测定管中蛋白质浓度（ug/mL) (责任编辑：qin) |