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摘 要：本论文采用一种新的工业过程操作优化方法——可视化优化方法，对利用生物表面活性剂硫酸粘杆菌素通透性处理重组大肠杆菌BL21生产海藻糖合成酶的工艺条件进行优化。结果表明：以1。40 g/L的硫酸粘杆菌素为渗透剂，35℃渗透处理72 min，即得透性化细胞海藻糖合酶，酶活是传统超声破碎法制得的2。09倍。所得透性化细胞间歇反应时，以30%麦芽糖为底物进行海藻糖转化实验，转化率可达70%，重复使用16批（12 h/批），转化率可保持在65%以上。77616

毕业论文关 键 字：海藻糖合成酶，硫酸粘杆菌素，通透性处理，可视化优化方法

Abstract：For optimizing the technological conditions of producing trehalose synthase from E。 coli BL21 after permeated by colistin sulfate, a novel visualized method for the operation of industrial process called visualized optimization method was adapted in this paper。 The results indicated that a proper process was achieved with cell suspension treated by 1。40 g/L colistin sulfate for 72 min at 35℃ and the obtained enzyme activity was 2。09 times more than that of traditional methods。 Utilizing the permeabilized cells for batch fermentation, the maximum conversion rate could reach 70% with 30% maltose as the substrate。 The cells could be also used for at least 16 batches (12 h per batch), the conversion rate kept above 65%。

Keywords: Trehalose synthase; Colistin sulfate; Permeable treatment; Visualized optimization method

目  录

1  前言 3

1。1  海藻糖的背景 3

1。1。1  海藻糖的化学结构 3

1。1。2  海藻糖的理化作用 3

1。1。3  海藻糖的应用 3

1。2  海藻糖合成酶 4

1。3  海藻糖合成酶的提取工艺 4

1。3。1  传统提取工艺 4

1。3。2  细胞的透性化处理 4

1。4  硫酸粘杆菌素对细胞的透性化处理 5

1。5  海藻糖的测定方法 5

1。6  本课题的研究内容及意义 6

2  实验材料与方法 6

2。1  实验材料 6

2。2  实验方法 7

2。2。1  重组大肠杆菌发酵生产海藻糖合成酶 7

2。2。2  通透性大肠杆菌的制备 7

2。2。3  酶活测定 7

2。2。4  海藻糖含量的测定 7

3  结果与讨论 8

3。1  通透性处理大肠杆菌实验参数的优化 8

3。1。1  通透性试剂的最适浓度 8

3。1。2  通透性处理的最适时间 8

3。1。3  通透性处理的最适温度 9

3。2  通透性细胞海藻糖合成酶的反应工艺条件优化 10

3。2。1  设计正交实验 10

3。2。2  函数拟合结果 10