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摘要：利用Lux-R和Lux-I群体感应系统构造出拥有合作关系的两个细菌种群，使他们在理想的状态下共同生长时拥有相互合作促进生长的效果。这两个菌群将用于研究具有合作行为的两个种群共同生长时，合作行为对其生物适应度的影响。本课题利用已有质粒，设计方案，对两种不同质粒进行切割组合，最终获得了2个目的质粒——pLuxRLasI-LacY和pLasRLuxI-LacY。第一步，先将pLuxRLasI-LacZ和pLasRLuxI-LacZ提取出来，利用PCR技术分别获取其中的LuxRLasI和LasRLuxI片段，并用两种限制酶切割，这是目标质粒的质粒框架。第二步，将存在于野生大肠杆菌中的LacY片段（乳糖操纵子中的乳糖通透酶基因）也通过PCR技术获取，并在两端加上2种限制性酶切位点。第三步，将两种不同的片段通过连接酶进行连接，并用氯化钙法导入到BL21大肠杆菌中。通过酶切电泳和DNA测序验证，目的质粒拼接成功。79878

毕业论文关键词：群体感应；合作种群；转化；质粒构建

Construction of bacterial plasmid in cooperative relationship

Abstract：Quorum Sensing (QS) based on LuxR-LuxI was used to construction a cooperative community model。 Among this community, two strains of E。 coli with different plasmids display cooperative behavior when growing in lactose-containing media。  The ecological model can be used to study the influence to fitness when biological coexistence by cooperation。 Some molecular methods were used in this study, such as plasmid extraction, PCR, gel electrophoresis and transforming。 Finally, two target plasmids, pLuxRlasI-lacY and pLasRLuxI-lacY, were First, I extracted the LuxLas-LacZ plasmid and used the PCR to obtain the LuxLas sequence and cut it with two restriction endonuclease, which is the main sequence of the target plasmid。Second , I obtained the lacY sequence (lactose permease gene) in the wild E。 coli by PCR and add to two restriction sites at both ends。Third, these two fragments were ligated and transformed into BL21 E。 coli by calcium chloride method。 The target plasmids were testified through restriction analysis and DNA sequencing。 

KeyWords：quorum sensing; cooperative population; transformation; plasmid construction

目  录

1  绪论…1

1。1  研究背景 1

1。2  研究目的 2

1。3  国内外研究现状…2

1。4  研究内容 3

1。4。1  预计构建的质粒…3

1。4。2  原材料质粒…5

1。4。3  质粒的构建方法…6

2  材料与方法7

2。1  实验材料…7

2。1。1  菌种与质粒 …7

2。1。2  材料、仪器和试剂7

2。1。3  培养基8

2。2  实验方法…8 

2。2。1  质粒提取方法 8

2。2。2  割胶回收方法 9

2。2。3  琼脂糖凝胶电泳方法…9

2。2。4  PCR扩增…10

2。2。5  细菌基因组DNA的分离纯化（SDS法）11

3  结果与分析13

3。1  实验方案…13

3。2  结果与分析13

4  讨论与展望19

4。1  结论…19

4。2  展望…20

致谢…21

参考文献 22

1  绪论

一直以来，人们都对生物种群间不同的生存关系对生存的影响做着各式各样的研究。在自然界中，不同物种、相同物种不同种群甚至同一种群不同个体间都存在着不同的生存关系，这些关系有合作、竞争、捕食、寄生等，这些关系对生物的生存存在着何种作用（促进、抑制）一直是自然科学家们研究的重点。在细菌中，个体间的关系无法确切研究，一般都是以种群间的关系作为研究对象。通过研究种群间关系对生长的影响，可以获得更好的细菌培养方式，从而获得更好的菌种用于生产。论文网 (责任编辑：qin)