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原理：脲酶存在与大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳，水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素情况。土壤中脲酶活性的测定以尿素为基质，根据酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚-次氯酸钠作用生成蓝色靛酚，来分析脲酶活性。

试剂：(1)甲苯 （2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100mL。 （3）柠檬酸缓冲液（pH 6。7）：184g柠檬酸和147。5g氢氧化钾溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/L氢氧化钠将pH调至6。7，用水稀释定容至1000mL。 （4）苯酚钠溶液（1。35mol/L）：62。5g苯酚溶于少量乙醇，加2mL甲醇和18。5mL丙酮，用乙醇稀释至100mL（A液），存于冰箱中;27g氢氧化钠溶于100mL水（B液）。将A、B溶液保存在冰箱中。使用前A液、B液各20mL混合，用蒸馏水稀释至100mL。（5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂至活性氯的浓度为0。9%，溶液稳定。 （6）氮的标准溶液：精确称取0。4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000mL，得到1mL含有0。1mg氮的标准溶液；再将此液稀释10倍（吸取10mL标准液定容至100mL）制成氮的工作液（0。01mg/mL)。

操作步骤：称取5g土样于50mL三角瓶中，加1mL甲苯，震荡均匀，15min后加10mL 10%尿素溶液和20mL pH6。7柠檬酸盐缓冲液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤，过滤后取1mL滤液加入50mL容量瓶中，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1小时内在分光光度计上于578nm波长处比色（靛酚的蓝色在1小时内保持稳定）。 标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液，移于50mL容量瓶中，然后补加蒸馏水至20mL，再加入4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1小时内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

注意事项：（1）每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其它操作与样品实验相同，以排除土壤中原有的氨对实验结果的影响。 （2）整个实验设置一个无土对照，不加土样，其它操作与样品实验相同，以检验试剂纯度和基质自身分解。 （3）如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样。

结果计算：以24小时后1g土壤中NH3-N的毫克数表示土壤脲酶活性（Ure）。来-自~优+尔=论.文,网www.youerw.com +QQ752018766-

Ure=(a样品-a无土-a无基质)×V×n/m

式中：a样品为样品吸光值由标准曲线求得的NH3-N的毫克数；

a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的NH3-N的毫克数；

a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的NH3-N的毫克数；

V为显色液体积；n为分取倍数，浸出液体积/吸取滤液体积；

m表示烘干土重。