毕业论文移动版

也有学者搭建枯草芽孢杆菌属生产氨基葡萄糖，枯草芽孢杆菌是一种不致病的无 内毒素的公认无毒的细菌，被广泛应用为生产生化制品和药物分析应用有利的化合物 的一个平台。在先前的工作中，我们通过 N-乙酰葡糖胺的合成途径和 N-乙酰葡糖胺 相关代谢网络的模块优化的构建设计枯草杆菌来生产 N-乙酰葡糖胺[13]。但是氨基葡 萄糖合成酶和氨基葡萄糖乙酰化酶的空间结构并没有考虑在内。另外，枯草杆菌的一 些固有的细胞特性，尤其是在养分耗竭情况和高维持代谢的情况下的芽孢形成被认为 是工业生产中不可取的。N-乙酰葡糖胺合成途径和枯草杆菌生产的 N-乙酰葡糖胺的 一般细胞特性需要优化以提高 N-乙酰葡糖胺的产量。与革兰氏阴性菌的大肠杆菌相 比，革兰氏阳性菌枯草芽孢杆菌被认为是一种 GRAS 有机体，是自由的外毒素和内 毒素，不会在工业生产过程中引发噬菌体性感染的问题。因此，使用枯草芽孢表达系 统用于食物和医药产品的生产比使用大肠杆菌更受人们的高度青睐。此外，代谢途径 和枯草芽孢杆菌中的氨基糖的调控机制已被广泛研究。

1。3 欧文式杆菌简介

欧文氏杆菌(Erwinia tasmaniensis sp。)，寄生于植物并引起腐败病。是酷似大肠杆 菌的一种细菌。属名是尊重美国植物病理学家 Erwin F。 Smith 从而得名，但有很多学 者认为应将欧文式杆菌纳入大肠杆菌种属。是因为欧文式杆菌含有果胶多聚半乳糖醛 酸酶，极易侵害植物。其典型种是解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora sp。)。欧文氏杆菌主要为单个细胞，0。5~1。0×1。0~3。0 μm，直杆菌。以周生鞭毛运动为 主，革兰氏阴性。从果糖、葡萄糖、半乳糖、蔗糖等糖类中产酸。产气比较微弱或不 产气。不能把淀粉水解成糊精以下的产物。最高温度在 32-40℃之间，最适的生长温 度在 27~30℃。它属于兼性厌氧菌，但某些种的厌氧生长力较弱。氧化酶为阴性，接 触酶为阳性。它作为植物病原菌、腐生菌或附生植物区系组分和植物联系在一起，也 从动物和人的寄生中分离到了一种。它的 DNA 中 G＋C 的范围为百分之 50~58 g 每 分子。文献综述

1。4 基因工程菌的构建

将目的基因与载体连接后进行双酶切验证后导入细菌体内使其表达，产生所需要 的蛋白的细菌称为基因工程菌。基因工程是把基因的技术运用到生命科学上，造福于 人类主要是运用到了氨基酸种类的不同作用。构建基因工程菌株实质是一种微生物育 种手段，其中包括了原生质体融合、诱变育种和基因工程等方法。其中诱变育种筛选 菌株进行工作量大、随机性强得特点导致最终成功率就较低，所以诱变育种在高效降 解污染物的研究中进程中应用较少。现在的育种方法主要是原生质体融合技术和基因 工程技术，这两种方法效率高并且定向较准确。目前基因工程菌的构建有以下几种方 法：(1) 多质粒新菌株的构建；(2) 原生质体融合技术；(3)质粒 DNA 和染色体 DNA 的体外重组。

比如，文献中有相关学者分离到一株假单胞菌(Pseudomonas sp。)，发现此菌能够 将对硝基苯酚作为唯一的碳源和氮源，在基本培养前提下正常生长。在加入外加氮源 后，该假单胞菌将对硝基苯酚降解同时在培养液中生成并积累了亚硝酸根[14]。加入葡 萄糖后菌种对对硝基苯酚的降解并没有明显的促进作用，可是加入微量的酵母粉就会 极大促进对对硝基苯酚的降解。从性质来说，菌种对多种芳香族化合物都有比较广泛 的底物适应性，并且有降解能力。该假单胞菌为受体菌, 通过接合转移将甲基对硫磷水解酶基因 mpd 克隆并转至该菌中，最终得到甲基对硫磷水解酶活性的基因工程菌 PM，其中工程菌 PM 能够以甲基对硫磷为唯一碳源并且具有较高的稳定性和甲基对 硫磷降解活性，在基础培养条件下正常生长。硝基芳香族化合物是工业上重要的原料， 被普遍地用作染料、医药、农药、塑料等物质的重要合成前体, 通常在使用和生产过 程中被释放到环境中，对环境造成严重的污染的同时也破坏了生态系统的平衡。再如 有机磷农药甲基对硫磷在环境中水解释放出对硝基苯酚, 对硝基苯酚有很强的毒性， 这就导致了环境的严重破坏，甚至有可能危及人类生命。国外对硝基苯酚的生物降解 研究已有较长的一段时间，是属于被监测污染物，但是至今降解途径仍未确定。此外， 对硝基苯酚的芳香环上硝基的引入也使得这类化合物的生物降解变得极其困难。所以 对对硝基苯酚降解菌的分离相对于对硝基苯酚的降解机制具有重要意义，降解对硝基 苯酚也已经迫在眉睫。来;自]优Y尔E论L文W网www.youerw.com +QQ752018766- (责任编辑：qin)