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3  瓜蒌皮多糖的提取文献综述

3。1  材料

3。1。1  主要材料

瓜蒌

3。1。2  主要试剂和仪器

试剂：葡萄糖，氯仿，石油醚，正丁醇，双氧水，95%乙醇，苯酚等 

仪器：多功能粉碎机，恒温水浴锅，DEAE-纤维素，离心机，透析袋，分光光度计等

3。2  瓜蒌皮多糖的提取方法

将瓜蒌皮洗净、切碎、烘干后，利用多功能粉碎机粉碎过筛。

称取3g置于培养皿中，共准备5个左右的培养皿。

先用石油醚进行初步脱脂，再用95%乙醇进行脱色。

放在室温下晾干后采用热水浸提法，每次原料和水之比为1:10，浸提温度为80℃，浸提时间为1。5 h，共需浸提4次，浸提完成后合并4次浸提液。

在70℃的水浴锅内将浸提液的体积浓缩到原来的1/2。

加入5%三氯乙酸溶液反复脱蛋白。

3000 rpm下离心10 min。

取上清液与95%乙醇按体积比1:3混合，醇沉12-24h。

之后将离心机转速设置成3000 rpm，离心15 min。

取沉淀，用无水乙醇洗涤2-3次。

后经冷冻干燥得瓜蒌皮多糖。其工艺流程如下：

瓜蒌皮→洗净、切碎、烘干→粉碎→脱脂、脱色→热水浸提→合并→浓缩→脱蛋白→离心→醇沉→离心→洗涤→冷冻→干燥→瓜蒌皮多糖

4  瓜蒌多糖的分离与纯化

4。1  试剂和仪器

试剂：蒸馏水 葡聚糖G-50 

仪器：层析柱 电磁炉 锅 烧杯 冰箱 冷冻干燥仪 小玻璃瓶 保鲜膜

4。2  分离纯化的主要方法

将提取得到的瓜蒌多糖进行凝胶柱层析，根据粗多糖中各多糖分子量的不同而将它们依次洗脱出来。

本实验采用的层析介质为葡聚糖，洗脱液为蒸馏水。首先将用乙醇保存的葡聚糖倒入容器中沸水预浴溶胀，目的在于使乙醇全部挥发掉，乙醇挥发掉的同时在容器中加入蒸馏水以至于葡聚糖始终保持湿润状态。当保护溶剂从乙醇全部置换成蒸馏水后停止加热，待温度降低到室温时备用。来;自]优Y尔E论L文W网www.youerw.com +QQ752018766-

计算出备用的溶液中葡聚糖所含的百分比以及层析住所需装填的葡聚糖的量，根据这两个数值来确定倒入层析柱中葡聚糖溶液的体积，因为层析住中葡聚糖过多或过少都会影响上样效果。填入葡聚糖后打开层析柱底部的阀，使洗脱液蒸馏水流出，在凝胶柱顶部不断加入蒸馏水，排除气泡，直至葡聚糖上液面不再发生变化。

当洗脱液蒸馏水液面下降至与葡聚糖液面相切时，将事先溶解好的瓜蒌皮多糖溶液用滴管沿着层析柱管壁缓慢加入，按照此法加入三至四厘米的多糖溶液，当多糖溶液刚好全部进入葡聚糖凝胶柱时再用滴管沿着管壁缓慢加入蒸馏水，使葡聚糖凝胶柱始终保持湿润状态。

当有颜色的多糖溶液洗脱下降至葡聚糖凝胶柱底部时，用标有序号的小玻璃瓶收集缓冲液，直至液体没有颜色收集结束。关闭层析柱阀门。

将收集的小玻璃瓶用保鲜膜封住口，在保鲜膜上扎上数个小孔，放入冰箱冷冻数小时。

冷冻后的玻璃瓶放入冷冻干燥仪中进行干燥，由于封口的保鲜膜上有小孔，所以在干燥过程中既保证了洗脱液可以蒸发又保证了干燥后的固体物质任保留在玻璃瓶内。

得到的固体物质进行纯度分析，再将其核磁共振及质谱测试，以确定其结构。