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2。1。3 供试土壤类型

南京黄棕壤、江西红壤、东北黑土

2。2 实验方法

2。2。1 土壤试验

不同土壤类型：分别称取500 g三种类型的土样于1000 ml 锥形瓶中，在25℃的恒温培养箱中培养7d后，取出各类土样于干净的白瓷盘中，一边喷洒环氟菌胺的丙酮标准溶液，一边搅拌，使三类土壤中环氟菌胺的浓度都为5 mg·kg-1,待溶剂挥发后，调节土壤含水量，使其达到饱和持水量的60%，继续放于25℃的恒温箱中继续培养，期间定时补充水分，保持土壤含水量恒定，于0d、3d、7d、14d、21d、30d、45d取样，测定土壤酶活性。来;自]优Y尔E论L文W网www.youerw.com +QQ752018766-

不同初始浓度：方法同上，土壤只用南京的黄棕壤，添加浓度为0、5、10、50、100 mg·kg-1。

2。2。2 酶活测定

土壤蔗糖酶、脲酶、脱氢酶的活性测定方法参照《土壤酶及其研究法》[17]并稍加改进。

2。2。2。1 蔗糖酶活性测定方法

蔗糖酶活性测定方法采用 3，5-二硝基水杨酸比色法。以蔗糖为基质，根据酶促产物葡萄糖与3，5-二硝基水杨酸生成有色化合物 3-氨基-5-硝基水杨酸的量进行比色测定。称5g风干土壤于 50ml 三角瓶中，注入15ml 8 % 蔗糖溶液，5ml ph 5。5 磷酸缓冲液和5滴甲苯，放入37℃恒温箱中震荡培养24h。到时取出，迅速从垫有滤纸的漏斗中过滤到 50ml 三角瓶中，从中吸取1ml滤液注入50 ml 容量瓶中，加 3ml 3,5-二硝基水杨酸，并在沸水域中加热5 min ,随即转移至自来水流下冷却3 min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50 ml ，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。同时做标准曲线、无基质对照和无土壤对照试验。蔗糖酶活性以 24h 后每克土样所产生葡萄糖的质量来表示（mg·g-1）。 

标准曲线：分别取0。01, 0。05,0。1,0。3,0。5 mg / ml 浓度的蔗糖溶液1 ml，按照测定酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖溶液浓度为横坐标绘制成标准曲线。得标准曲线如图二所示。