摘 要:为研究野生番茄的种资保存和性状基因的功能分析，本论文分别以S.sitiens的根、茎和叶三种外植体进行再生诱导与遗传转化体系的构建。愈伤组织介导的外植体根、茎、叶的再生，再生率分别为84%、63%和100%。通过愈伤组织介导的再生，从初始外植体获得转基因（GUS）植株，用时大约45d，转率为36%。报告基因通常用来检测转化是否成功。愈伤组织介导的再生和转化系统将有益于种质资源保存、基因挖掘和S.sitiens基因工程。10892
关键字:S.sitiens；再生；转化；GUS
The system construction of regeneration and genetic transformation on S.sitiens
Abstract: In order to study the germplasm preservation of wild tomato-like nightshade species and analysis the function of trait genes, the callus-mediated regeneration systems of Solanum sitiens was developed based on three kinds of explants from roots, stems and leaves, and the regeneration rates, 84, 63 and 100 %, were achieved for root, stem and leaf explants, respectively. Reporter gene (GUS) was used to monitor the transformation, GUS gene was successfully transformed with the rate of 36% through callus-mediated regeneration, which took about 45 days from initial explants to obtaining transgenic plantlets. The established callus-mediated regeneration and transformation systems will benefit germplasm preservation, gene mining and genetic engineering of S.sitiens.
Keywords: Solanum sitiens; Regeneration; Transformation; GUS
目 录
摘要 1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.2 培养准备 2
1.2.1 无菌苗培养 2
1.2.2 再生培养基 2
1.2.3 转化培养基 3
1.3 方法 3
1.3.1 无菌苗获得 3
1.3.2 外植体选择 3
1.3.3 细菌菌株、质粒载体和细菌培养 3
1.3.4 再生的诱导培养 4
1.3.5 转化的诱导培养 4
1.3.6 对植物组织进行GUS检测 4
2. 结果 4
2.1 不同组合的生长调节剂对愈伤组织的诱导及植株再生的影响 4
2.2 愈伤组织介导的再生和转化的形态学分析 4
3. 讨论 6
参考文献 7
致谢 10
S.sitiens的再生与遗传转化体系构建引言
Solanum sitiens是一种濒临灭绝的茄科茄属野生番茄，它生长在秘鲁和智利地区世界上最干旱的地区之一的阿塔卡玛大沙漠等区域，年降水量低于5mm，海拔2500-3500m，南北长230km。在这种环境条件下，sitiens非常稀有，是荒芜的落基山脉上生命短暂的多年生植物[1-4]。sitiens有耐干旱的特点，可以与栽培番茄杂交，交叉授粉可以获得高坐果率，在1929年第一次被Johnston[5]描述。
到目前为止，有关sitiens的研究主要集中在耐旱机制[6]，番茄中部分同源染色体合成与转运机制[7]，花粉淀粉[8]，基因多样性和群体结构[9]，休眠[10]，基因突变[11]和基于35S rDNA的分子进化[12]。然而，sitiens的再生与转化到目前为止还没有相关报道。再生可以通过多种不同的途径，直接通过外植体器官[13]，通过愈伤组织的介导[14]，通过诱导体细胞胚胎（SE）[15]或者类原球茎（PLBs）[16]获得。
野生种质资源对于粮食增产来说是一个非常重要的基因资源[17]，但是由于人类长期过度开采，忽视了对它们的保护，野生种质资源变得非常稀少，有的甚至丢失了。建立一个有效的试管再生体系是一个保护野生种质资源的重要方法，并且是进行基因转化的重要的先决条件。基因转化是一个进行基因功能研究强有力的工具。因此，有效的再生与转化体系的建立可以帮助野生种质资源基因的开发和粮食增产。再生与转化体系的发展有助于推动sitiens基因在相关茄属植物（番茄、马铃薯、优尔椒等）分子育种中的利用。 S.sitiens的再生与遗传转化体系构建:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_10081.html