摘要目的 分析Lhx4条件性敲除基因的小鼠的基因型方法 运用Pax2cre转基因小鼠作为内耳耳蜗基因敲除模式小鼠，在内耳耳蜗中敲除Lhx4，研究Lhx4在小鼠先天性耳聋中的重要作用。本项目运用PCR技术，有望鉴定出Lhx4条件性敲除的内耳耳蜗基因小鼠构建成功，根据小鼠基因的序列设计用于基因型鉴定的引物，取材，提取DNA，PCR目的片段，分析PCR结果，相应的组织器官发育阶段联系起来，指导转基因小鼠作为工具鼠应用于条件性敲除中，有助于耳聋疾病发病机制的分析和治疗。88517
结果  成功分析得到Lhx4条件性敲除基因的小鼠的基因型
毕业论文关键词：Lhx转基因小鼠   PCR技术  基因型鉴定 cre/loxp系统


Abstract Objective To analyze the genotype of mice with Lhx4 conditional knockout genes
Methods Pax2cre transgenic mice were used as knockout model mice in the inner ear cochlea, and Lhx4 was knocked out in the inner ear cochlea。 The important role of Lhx4 in congenital deafness was studied。 In this project, PCR was used to identify Lhx4 conditional knockout inner ear cochlear gene mice。 The primers were designed according to the sequence of mouse genes。 The primers were used for genotyping, and the DNA and PCR fragments were extracted and analyzed。 , The corresponding organization and organ development stage linked to guide the transgenic mice as a tool mouse used in conditional knockout, contribute to the pathogenesis of deafness disease analysis and treatment。
Results The genotype of Lhx4 conditional knockout gene was successfully analyzed
Keyword: Lhx4transgenic mouse；PCR technology；Genotype identification；  Cre / loxP system







1引言   1
1。1背景源Y于Y优E尔Y论L文W网wwW.yOueRw.com 原文+QQ752018.766 介绍   1
1。2基因介绍   1
1。3基因敲除原理   2
1。4 耳聋疾病   2
2小鼠饲养与维护   3
2。1小鼠特性与实验规范   3
2。1。1小鼠的特点   3
2。1。2生物学特性   3
2。1。3 解剖学特性   4
2。1。4生理学特点   4
2。2实验规范   4
2。2。1 饲养管理要求   4
2。2。2小鼠基本操作技术   4
2。2。3小鼠的免疫预防   5
3实验材料与方法   6
3。1实验材料   6
3。1。1实验试剂   6
3。1。2实验仪器   6
3。2实验方法   7
3。2。1DNA的采集与提取   7
3。2。2引物设计   8
根据引物设计原则，设计的引物为：   8
3。2。3聚合酶链式反应（PCR）   9
3。2。4PCR反应体系（30ul）   11
 
3。2。5聚合酶链式反应From优Y尔E论W文W网wWw.YouERw.com 加QQ75201,8766 （PCR）   12
3。2。6琼脂糖TAE凝胶电泳分离PCR产物   13
4实验结果分析   14
4。1  Cre酶切退火温度的确定   14
4。2凝胶电泳成像分析   15
References：   16
致   谢   16



1引言

1。1背景介绍
目前的研究结果多局限于细胞系及组织水平，缺乏整体水平的研究。利用基因剔除和转基因技术，从整体动物水平来研究基因功能已成为现代生物学领域常用的研究策略。基因敲除（knock out）技术是利用同源重组原理将外源基因序列转移至胚胎干细胞内，以取代基因组上序列相同或相近的基因并使后者完全丧失功能,彻底敲除靶基因。条件性基因敲除（Conditional knock out）主要通过染色体位点特异性重组酶系统Cre-LoxP来实现靶基因的敲除。基因敲低（knock down）技术是通过基因遗传修饰的方法使得生物体中某些特定基因的表达量降低，这些修饰方法有染色体DNA的改变、与mRNA转录本或靶基因具有互补序列的各种小RNA的干涉作用。这些方法具有手段简单，易于操控的特点，而且可以不同程度的干涉目的基因的表达。为进一步研究Lhx4的功能，分别构建了Lhx4条件性基因敲除小鼠（Lhx4-Conditional knockout小鼠）与Lhx4hRNA转基因小鼠（Lhx4-knockdown小鼠），并对获得的模式小鼠进行了鉴定和表型初步分析。论文网 Lhx4条件性敲除小鼠的基因分析:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_163009.html