1。3。3 木聚糖酶在食品行业的应用来自优I尔Y论S文C网WWw.YoueRw.com 加QQ7520~18766

木聚糖酶作为食品添加剂具有很大的优越性[9]。木聚糖酶是蛋白质,而且无毒无害； 所有的酶都具有专一性和高效性,在使用的过程中经济成本低且目的性强。此外，木聚糖 酶的酶促反应条件温和,可以有效避免食品加工过程中营养成分流失带来的损失。

小麦面粉中的非淀粉性多糖影响面团的流变性质和面食品的品质。在面包的制作过程 中加入木聚糖酶可以在制作过程和防止老化方面起到积极的作用。在果蔬加工成饮料和速溶产品的过程中，采用传统的制作方法会是纤维素等成分遭到 破坏，产品的利用率低，而且果蔬中存在的可溶性的木聚糖为粘稠物质，使得生产加工的 困难大大增加。如果在加工过程中采用木聚糖酶等的酶制剂来处理，就可在极温和条件下 使组织的细胞破壁，大大提高果蔬汁浸出率，还可降低提取液的粘稠度，从而降低成本。

木聚糖酶可用于生产功能性低聚木糖。低聚木糖具有增殖双歧杆菌的效果，且相比其 他低聚糖的用量少。低聚木糖的甜度很低，可以作为糖尿病病人的疗效食品。在白酒的制作过程中，木聚糖酶与纤维素酶等水解酶协同作用，破坏酿酒原料的结构， 提高发酵率，增大酒精的产率。

1。4 木聚糖酶基因的克隆

木聚糖酶在众多领域有着很重要的作用，具有很大的商业价值，因此对木聚糖酶的研 究显得尤为重要。国内外有很多学者致力于木聚糖酶的研究领域，到目前为止，已有多种 不同微生物来源的木聚糖酶基因的报道。尽管自然界中木聚糖酶含量丰富，但由于其很难 在天然材料中表达，分离纯化势必增加工业生产的成本，难以大规模生产。通过基因重组 表达，可以克服以上缺点，获得单一酶，成为解决木聚糖酶应用缺陷的一个突破点[10]。

1。5 选题目的

黑曲霉来源的木聚糖酶具有良好的耐酸性。[11]因此，从黑曲霉中克隆得到木聚糖酶， 对后续的研究更有优势。本研究从实验室中保藏的黑曲霉中克隆得到木聚糖酶基因，并将 其与载体连接，导入到大肠杆菌中，进行保种，便于后续的在原核或真核表达系统中进行 表达，用于对木聚糖酶理化性质的研究、酶学性质的分析、各种理化性质的改造等一系列 更为深入的研究。

2 材料与方法

2。1 材料

2。1。1 菌种与载体

黑曲霉（Aspergillus niger）、大肠杆菌（Escherichia coli）DH5α 为本实验室保存；

pUC-T Simple 载体购自康为世纪公司。

2。1。2 酶类与试剂论文网

超纯 RNA 提取试剂盒（DNaseⅠ）、SuperRT One Step RT-PCR Kit、pUC-T Simple TA 快速连接试剂盒、质粒小提试剂盒、限制性内切酶 Not-Ⅰ、Kpn-Ⅰ ,引物由华大基因公司 合成。

1%木糖标准液：称取预先于 105℃干燥至恒重的木糖 1。0000g,精确至 0。0001g,蒸 馏水溶解并定容至 100ml。 底物溶液配制[5]：木聚糖溶液配制精确称取木聚糖,精确至,加入磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液,水浴中加热至溶解,冷却后转入容量瓶中,用缓冲液定容至刻度,贮存于冰箱内备 用一般最多使用一周。

3,5 一二硝基水杨酸显色液(DNS 显色液)，实验室中存放。 磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲液：A 液,称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)71。62g,用蒸馏水溶解,并定容至 1000ml;B 液,称取柠檬酸(C6H8O7·H2O)21。01g,用蒸馏水溶解,并定 容至 1000ml pH5。0 缓冲液,取甲液 515ml,加乙液 485ml,混合均匀,用 pH 计校正。 黑曲霉中木聚糖酶基因的克隆(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_197567.html