华鳈MSTN基因克隆与多态性分析

摘要：华鳈（Sarcocheilichthys sinensis sinensis Bleeker）隶属于鲤形目、鲤科（Cyprindae）、鮈亚科（Gobioninae）、鳈属（Sarcocheilichthys），除西北高原的部分地区外，几乎遍布我国各主要水系。MSTN全称肌生成抑素（Myostatin），是对骨骼肌生长具有负调控作用的基因。本研究用RT-PCR方法，从华鳈中克隆获得了MSTN基因的cDNA序列，并对其进行了序列分析。结果获得长度为3325 bp的华鳈MSTN基因cDNA片段，编码区长为1128 bp，编码376个氨基酸，并进行了华鳈MSTN基因与其他物种的氨基酸序列的对比分析及同源性比较。本研究结果将为华鳈MSTN基因对肌肉生长的调控机制研究，MSTN基因多态性位点与生长性状的关联分析及分子标记辅助育种提供基础材料。94539

毕业论文关键词：华鳈，MSTN基因，RT-PCR，克隆，同源性比对

Abstract: Sarcocheilichthys sinensis Bleeker belongs to the Sarcocheilichthys genus of the subfamily Gobioninae in Cyprinidae of Cypriniformes。 It’s distribution is very extensive, which almost distribute in all main river systems in plain area of China except some parts of the Northwest Plateau。 The full name of the gene MSTN is myostatin, which was initially discovered in human and negatively regulates the growth of skeletal muscle。 In this study, using the RT-PCR method, cDNA sequence of MSTN gene was cloned and sequenced from S。 sinensis。 The results showed that cDNA fragment of S。 sinensis MSTN gene is 3325 bp long with a coding region of 1128 bp and encode a peptide sequence of 376 amino acids, meanwhile, comparative analysis with other species of the amino acid sequence of S。 sinensis MSTN gene and the homology analysis were also carried out。 These results will be helpful for future studies on mechanism of MSTN affecting muscle growth, polymorphism and growth traits association analyses and molecular marker assisted breeding in S。 sinensis。

Keywords: Sarcocheilichthys sinensis, MSTN gene, RT-PCR, Cloning, Homology

1 前言 3

2 材料与方法 4

2。1 试验仪器 4

2。2 试验样品 4

2。3 主要试剂 4

2。4 华鳈MSTN基因cDNA序列扩增 5

2。4。1 RNA的提取 5

2。4。2 华鳈cDNA制备 5

2。5 引物设计和PCR扩增 5

2。6 琼脂糖凝胶DNA回收 6

2。7 克隆 6

2。7。1 配制LB固体培养基 6

2。7。2质粒转化与克隆测序 7

3 结果 8

3。1 所提取华鳈组织DNA的浓度 8

3。2 华鳈MSTN基因的PCR扩增结果 9

3。3 MSTN基因进化树构建 9

3。4 MSTN基因氨基酸序列同源结果 10

3。5 一致性与类似性比较 11

4 讨论 13

结论 14

参考文献 15

致谢 17

1 前言

华鳈(Sarcocheilichthys sinensis sinensis Bleeker) 属鲤形目，隶属于鲤科(Cyprindae)、鮈亚科(Gobioninae)、鳈属(Sarcocheilichthys)。分布极广，除西北高原的部分地区外，几乎遍布中国各主要水系，在平原地区的江河、湖泊均有分布。为江河、湖泊中常见小型鱼类，一般生活在水流缓慢的中下层水体，用下颌刮食附着在砾石上的底栖无脊椎动物、着生藻类及植物碎屑，食性较杂[1]。5-6月繁殖，卵粘性。最大个体能长至20厘米，为小型鱼类，个体小，数量少，经济价值不大，生长缓慢，适应性强，具有一定药用价值的鱼种。鱼体棕色；体侧排列着4条宽阔的黑斑带环，鳍灰黑，边缘色浅。华鳈肉质细嫩，味道鲜美，深受当地消费者喜爱[2]。有关华鳈的研究较少，且主要集中在分类[3]、形态[4]、生物学[5]、驯养[6]和繁殖[7]等方面。但有关可食部分含有率以及肌肉营养成分MSTN基因结构信息研究的内容尚未报道。因此此次目的是为获得华鳈MSTN基因结构信息，比较华鳈MSTN基因多与其他物种的氨基酸序列，进行同源性分析比较出其亲缘关系远近，所进行的华鳈MSTN基因克隆与多态性分析研究。华鳈MSTN基因克隆与多态性分析:http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_202587.html