2.1.4实验耗材· 7
2.1.5细胞株 7
2.2细胞培养 7
2.3裸鼠脑瘤U87MG-LUC细胞脑立体定位微量注射 8
3、结果· 9
4、讨论· 12
5、致谢 13
6、参考文献· 14
第一章前言
1.1小鼠肿瘤模型的进展
脑胶质瘤是指脑内异常细胞的形成是中枢神经系统最常见而又最难治的恶性肿瘤，约占颅内肿瘤的4O%～5O%，由于其瘤细胞的生物多样性，至今仍然是所有恶性肿瘤中接受综合性治疗预后最差的一类中枢神经系统肿瘤。[15]多年来，脑胶质瘤患者的寿命无明显改善，各种疗法均难以达到根治程度，几乎毫无例外地迟早要复发。[15]在恶性脑瘤晚期，肿瘤细胞甚至会转移至身体其他脏器严重威胁着人类的生命，在美国，脑瘤平均五年存活率为33%，患者的死亡率较高。所有型态的脑瘤都会产生相应的症状，随着脑瘤地增大必会压住神经，影响其功能，而产生些症状包含头痛、抽搐、视力问题论文网、呕吐、意识改变当疾病进展时，可能发生失去意识。虽然近几年来，肿瘤化疗取得了相当的进步，肿瘤患者生存时间明显延长，但是化疗在杀伤肿瘤细胞的同时，也造成机体骨髓抑制和免疫功能低下，毒副作用强大。于是抗肿瘤药物的筛选成了整个研究过程中很重要的一个环节。同时为了很好地了解肿瘤的发病机制、肿瘤与宿主的关系、肿瘤侵袭与转移的过程和治疗措施的有效性,以及寻找选择性高的抗癌药物、提高新药筛选质量，创制出了各类肿瘤的筛选模型［1］。其中肿瘤实验动物模型的建立为研究其发病机制、生物学特性和检测各种治疗方法提供了一种高模拟性工具。
近年来国内外很多学者运用了各类动物模型进行研究，但在实验中如何准确注射位点、适当的进针深度、适当的细胞接种量和适当的注射速度等数据是研究重要因素。本研究根据不同研究需要选择不同接种量。朱侗明等将4微升GL261细胞悬液(含GL261细胞约1x105个)注入C57BL/6小鼠于前囟前方1.0 mm，右侧距中线1.0 mm处钻孔，进针2 mm(距硬膜)，接种7d后成功形成肿瘤，成瘤率为100%；将10微升C6细胞(含C6细胞约106个)注入SD大鼠于冠状缝后1 mm、中线右3 mm钻孔，进针约4 mm，7d后成功形成肿瘤；将C6细胞注射于BALB/c小鼠左前肢皮下细胞数为106个，约4天后成瘤，成瘤率100%［2］。Jun-ichiro Kuroda 等将5微升U87MG- Luc细胞（5 × 105）注射到6~8周的雌性无胸腺的BALB / c nu / nu小鼠的右额叶，成功建立肿瘤模型且每天给药治疗即NK012和CPT -11结果表明NK012与CPT- 11 贝伐单抗相比对U87MG胶质母细胞瘤小鼠的治疗指数较高［10］。步星耀等将105个细胞U87MG神经胶质瘤细胞注射于雌性BALB / cnu / nu小鼠尾状壳成功建立肿瘤模型且成瘤率高 ( 100% ) ，肿瘤颅内生长稳定，组织病理学检查符合人脑胶质瘤形态特征，未见脑外转移［3］。Miaojun Han等将2x104/20微升IV级恶性胶质瘤细胞注入FoxN1裸鼠右侧颅骨下3mm成功建立了胶质瘤原位荷瘤模型［4］。Jan-Karl Burkhardt等将5x105个恶性胶质瘤细胞注入6周的雄性裸鼠右侧颅骨下2mm同样成功建立了胶质瘤原位荷瘤模型［5］。闫明霞等用人脑星型胶质母细胞瘤 U87MG成功建立裸鼠术后转移模型。[14]
1.1.2结语
综合各类学者的研究成果表明理想的肿瘤模型应能模拟并真实地重复人类肿瘤的自然发生、发展过程，并具有与之相同的病理和生化特点。用于建立脑胶质瘤原位移植瘤动物模型最常见的动物是雄性大鼠和雄性小鼠，因为：(1)鼠类脑胶质瘤的组织学生物
学行为和人类相似；(2)易于得到近交系，移植瘤不被排斥；(3)鼠的原位胶质瘤模型便于观察，并且动物容易获得和饲养，花费也少。[15]也有研究发现雌孕激素在一定程度上对脑胶质瘤的发生有负面影响，这样便更进一步支持雄性鼠在研究脑胶质瘤动物模型中的必要性。其中裸鼠即为从具有遗传突变引起劣化或缺失胸腺的实验室小鼠，由于T细胞数量的显着减少而导致免疫系统的应变。表型或主要外观的来看是缺乏体毛，这使得它有了“裸鼠”的称号。裸鼠在肿瘤研究中很有价值，因为它可以接受多种不同类型的组织和肿瘤移植物，而且不产生排斥反应。这些异种移植物通常用在研究测试成像和治疗肿瘤的新方法`优尔^文:论;文'网www.youerw.com。与其他小鼠相比移植的肿瘤可保持原肿瘤的染色体组型、组织学形态，与大鼠相比体积较小容易操作更精确可靠且重复性好同时各类试剂如麻醉剂用量都相对较少，饲养也较为廉价，且裸鼠移植胶质瘤模型容易成瘤。近年来转基因模型成为研究热点但这类模型只针对性的研究对于某一种基因缺陷导致成瘤，过强的针对性不适于大部分研究。接种于裸鼠颅内与皮下的胶质瘤模型都属于体内移植其中皮下模型移植瘤为异位生长，通常为了方便观察采用皮下移植瘤模型，皮下移植瘤模型尽管与人脑胶质瘤有类似的形态及生物学行为，但皮下移植瘤在模拟亲本肿瘤生物学特性方面有欠缺［7］，用于模拟人脑胶质瘤的体内试验也还有一定差距［2］。与皮下移植瘤模型相比，原位移植瘤模型生物学特性接近人类胶质瘤，且所处宏观和微观环境同人类胶质瘤相似，但不便于直接观察肿瘤大小［8］，对研究胶质瘤的颅内生长特性及治疗方法有一定的限制。使得很多基于原位移植胶质瘤模型的药物研究均以生存时间来评价药物疗效［9］。而体外成瘤更无法体现由于体内环境代谢等原因对药效和成瘤情况的影响。与此同时U87MG神经胶质瘤细胞成瘤率高 ( 100% ) ，肿瘤颅内生长稳定且未见转移。同时我们比较了各种接种量，确定尝试接种1x106和5x105两种细胞浓度以及前额皮层和第三脑室两个位点。 小鼠脑瘤模型的构建(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_45045.html