本氏烟（Nicotiana benthamiana, Nb）是一种优质的用于植物病毒学研究的模式植物。大多数的植物病毒极易感染于本氏烟，而且本氏烟也是其它病原微生物如细菌、卵菌、真菌等的宿主。另外，本氏烟生长周期短，植株较小易于栽培，而且具有良好的遗传转化和再生能力。鉴于此，本氏烟成为研究双生病毒复制蛋白的结构和功能的生物材料。

第一章 材料与方法

1. 实验材料与试剂

 1.1 实验材料

1.1.1 菌株与质粒

感受态细胞DH5和Trans-T1购自全式金公司。pEGFP质粒、农杆菌菌株EHA105及克隆载体pCAMBIA2300: FT:EGFP为实验室保存。ACMV (DNA A 质粒为pBIN1.3A，AMP+抗性，DNA-B 质粒为pBIN2B，Tet+)病毒质粒由杭州师范大学植物RNA信号传导中心主任洪益国教授提供。 

1.1.2 病毒

非洲木薯花叶病毒（African cassava mosaec virus）即ACMV病毒

1.1.3 受体植物

本氏烟（Nicotiana benthamiana) 

1.1.4 .植物生长条件

实验植物生长在无虫恒温（25℃）温室中，并给予16 h光照/8 h黑暗。

1.2 酶及化学试剂

实验室所用的各种限制性内切酶、T4 DNA连接酶等均购自NEB公司， Taq plus DNA聚合酶及Prime Star（PS）高保真聚合酶，购自TAKARA公司，PCR产物回收试剂盒和小量质粒提取试剂盒购自Qiagen公司，PCR引物合成、DNA片段测序均由上海英俊生物科技有限公司完成。

1.3 实验仪器

小型离心机（Eppendorf centrifuge 5424）；PCR仪（BIO-RAD C1000 Thermal cycler）；凝胶成像系统（BIO-RAD GelDoc XR+Gel Imaging System）；细菌培养箱（美国Thermal公司）；超净工作台（苏净）