1 材料与方法

1.1  实验材料

实验材料取自2014年3月13日采集绿化带下生长健壮的成年乔木桂花植株上未完全成熟的桂花果实（图1，A）。包括籽银桂、绿梗籽银桂、“庐州黄”籽银桂、莲籽丹桂4个品种。

1.2  培养方法 

1.1.1 外植体消毒

用自来水冲洗1～2次，然后去除外果皮取出种子，剥去种子的种皮后，在超净台上用75%的酒精浸泡35s，用无菌水漂洗3次，转入0.1%升汞溶液中灭菌，时间分别为3.5min，用无菌水漂洗3～4次。

1.2.2 接种

在灭完菌的超净台上，取出桂花种子中的幼胚接种到诱导愈伤组织的培养基，每瓶接种4个外植体（图1，B）。培养温度25℃，先进行30d 暗培养，然后转入光培养，每天光照14h，光照强度1500～2000lx。之后定期的观察幼苗的生长状况、测量相应的苗高，并且做好相应的记录。

1.2.3 幼胚离体培养

培养基：1升培养基需琼脂7g，蔗糖15g。

（1）1/2MS + 0.25mg•L-1TDZ+0.1 mg•L-1 NAA + 1.0 g•L-1 PVP；

（2）1/2MS + 0.5mg•L-1TDZ+0.1 mg•L-1 NAA + 1.0 g•L-1 PVP；

（3）1/2MS + 0.1mg•L-1TDZ + 1.0 g•L-1 PVP。

幼胚接种到诱导愈伤组织的培养基后，进行暗培养30d，然后进行光培养，之后定期的观察幼苗的生长状况、测量相应的苗高，并且做好记录工作。

1.2.4 愈伤组织的诱导

幼胚子叶切块诱导愈伤形成大量愈伤组织后，转接到分化培养基中，分化培养基为：

（1）1/2MS + 0.25mg•L-1TDZ+0.1 mg•L-1 NAA + 1.0 g•L-1 PVP；

（2）1/2MS + 0.5mg•L-1TDZ+0.1 mg•L-1 NAA + 1.0 g•L-1 PVP；

进行见光培养，每45d继代1次，观察每次愈伤组织上出现芽的分化情况，分别记录每次愈伤组织芽的分化率。

2  结果与分析

2.1不同激素条件对离体培养桂花幼胚存活率、愈伤化及出芽的影响

紫银桂幼胚在诱导愈伤组织的培养基上培养7d左右，幼胚的边缘开始膨大，幼胚的周边几乎都愈伤化，并转为绿色（图1，C、D）。由表1可知，在1号培养基上，幼胚的存活率为97.70%，而在2号培养基上，幼胚的存活率为100.00%。在1号培养基上，愈伤组织形成率达97.70%，而2号培养基上，愈伤组织形成率高达100.00%。另外2号培养基中的愈伤长势比1号培养基中的愈伤长势好，说明适当提高NAA的浓度有利于诱导愈伤组织的形成和生长。2号培养基的愈伤组织的出芽率要比1号培养基中的愈伤组织的出芽率高，2号培养基的出芽率为40.00%，1号培养基的出芽率为33.33%。说明适当提高NAA的浓度有利于诱导愈伤组织的分化。愈伤组织形成后，转接到1号培养基中，有助于愈伤组织的生长和分化表1不同激素条件对离体培养籽银桂幼胚存活率、愈伤化及出芽的影响

 培养基    外植体数      幼胚存活率      愈伤化率     出芽率     愈伤生长状况

                         （%）          （%）        （%）       

 1           48          97.70          97.70        33.33         + + + 

  2           25           100           100          40.00        + + + +

注：培养 7 d记录结果。“+”越多，说明长势越好。 桂花幼胚培养和桂花子叶切块诱导愈伤的研究(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_49490.html