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N-糖基化位点对毕赤酵母表达的重组弹性蛋白酶活性的影响(3)

时间:2020-07-31 20:39来源:毕业论文
2、YPD培养基(1L):10g酵母膏,20g蛋白胨,20g葡萄糖,若制固体培养基,加入20g琼脂粉,自然pH。 3、BMGY培养基(1L):15g酵母膏,20g蛋白胨,10g甘油和1

2、YPD培养基(1L):10g酵母膏,20g蛋白胨,20g葡萄糖,若制固体培养基,加入20g琼脂粉,自然pH。

3、BMGY培养基(1L):15g酵母膏,20g蛋白胨,10g甘油和100mmol/L的pH6.0磷酸钾缓冲液,4×10-4g生物素。(4×10-4g生物素:每100mL培养基添加0.2mL 0.02%的生物素,生物素是预先过滤除菌的。)

4、MD培养基(1L):13.4g酵母基本氮源(YNB),4×10-4g生物素和20g葡萄糖,自然pH,若制固体培养基,加入20g琼脂粉。(YNB:每100mL添加13.4%的YNB,YNB是预先过滤除菌的)

2.1.3 酶和试剂

限制性内切酶EcoRI、AvrII和T4 DNA连接酶购自Fermentas公司,Pfu DNA高保真聚合酶购自生工生物工程(上海)有限公司,SacI酶购自Thermo公司,DNA Marker DL10001、DNA Marker DL2501和DNA提取试剂盒购自上海捷瑞生物工程有限公司,其他化学试剂均为国产分析纯。

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