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2.2 实验方法
2.2.1 培养基
2.2.1.1 PDA培养基
1. PDA培养基
马铃薯葡萄糖培养基是一种用来培养真菌的半合成培养基。此培养基是由马铃薯,葡萄糖,琼脂等组成。其中马铃薯煮汁可以提供碳源,氮源,无机盐和维生素等,葡萄糖主要作为碳源,琼脂为凝固剂。马铃薯的表皮中含有龙葵碱的化学成分,对菌丝生长有抑制作用,所以马铃薯在使用时要去皮。在PDA培养基上大多数真菌都可以良好生长。由于多数真菌喜欢偏酸性环境,而培养基灭菌过程中部分糖类会转化为酸,所以一般不需要调PH值。马铃薯浸出粉有助于各种霉菌的生长;葡萄糖提供能源;琼脂是培养基的凝固剂灭菌倒平板后的培养基24小时后未长杂菌为合格培养基,按无菌操作进行。源`自,优尔`.论"文|网[www.youerw.com
培养基成分如下:
马铃薯去皮 200g
葡萄糖 20g
琼脂 20g
水 1000mL
2. PDA培养基的制作方法
(1)称量
用电子天平准确量取去皮的马铃薯200g、20g葡萄糖、20g琼脂。
(2)煮沸过滤
将去皮新鲜马铃薯切成1cm3见方的小块(约指甲大小),加适量水煮沸20min后,煮至无白心为止,用四层纱布过滤,滤渣继续煮,滤渣最后用纱布包裹,挤干。(提示:煮沸的过程中,要不时地搅拌,以免烧糊。)
(3)定容
加入20g葡萄糖、20g琼脂,加热搅拌至琼脂完全融化,并补足水量,加自来水稀释定容至1000mL。
(4)装瓶
趁热用5000微升的枪移取5mL至大号试管,共装20只,注意试管不要粘着培养基,以减少杂菌污染若试管口部位粘着有培养基的,用干净纱布擦去培养基后,再塞上硅胶软噻,分装完毕后将试管全放在大号烧杯中,用铝箔纸包裹好,将剩下的培养基分别装在500mL锥形瓶中,用硅胶塞塞住。
(5)灭菌
分装好的培养基要及时进行灭菌处理,不宜放置时间过久,否则培养基内会长出杂菌,以当日制作的培养基,当天灭菌为妥。灭菌温度为121℃,灭菌时间30min。
对里氏木霉产纤维素酶时种子培养的优化(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_62252.html