提取土壤悬浊液：取少量的土壤于锥形瓶中，加入少量的蒸馏水，绑上封口膜，将其放入摇床中，使其充分摇匀形成悬浊液。

（2） 梯度稀释：取8个离心管，用记号笔分别标上1-8号。分别在1-8号中的离心管放入90uL的蒸馏水，利用移液枪向充分混匀的锥形瓶中吸取10uL的悬浊液放入1号管中，再从1号管中取出10uL放入2号管中，以此类推，形成10-1 、10-2 、10-3 ..... 10-8 浓度的菌液。 

（3） 浇培养基：在超净台中取出4个已灭菌的培养皿，并用记号笔标上1-4号。向培养皿中倒入充分融化的LB培养基，并立即放平，待凝。

（4） 涂布平板：利用移液枪向10-2 、10-4、 10-6、10-8 浓度的离心管中吸取少量菌液，将菌液滴入LB培养皿中。将涂布玻棒在酒精灯上充分灼烧，冷却。涂布玻棒冷却过后，将悬浊液轻轻涂开、均匀铺满整个平板，并防止平板培养基破损。

（5） 平板培养：将平板倒置放入30︒C 恒温箱中培养24h左右。

（6） 挑单菌落：取出24h后培养的平板，取出菌落生长较好的培养皿，根据菌落的形态，颜色，大小的不同，标出平板中菌落N个。

（7） 划线接种：在超净台中取出N个已灭菌的培养皿，向培养皿中倒入充分融化的LB培养基，并立即放平，待凝。并用记号笔在平板上分别标记1-N。用接种环将菌落分别接到平板上，将平板倒置放入30︒C 恒温箱中培养至形成单一的菌落，并观察菌落的形态。

（8） 液体培养菌种：取N个装有10mL液体 LB培养基的试管，分别标上1-N 号标记，在超净台中用枪头分别将1-N号培养皿中的菌种接入1-N号液体 LB培养基试管中。放入摇床中培养至液体浑浊。来`自^优尔论*文-网www.youerw.com

（9） 菌种的保存：准备N*2个离心管，在离心管上分2组标记上1-N记号，在第一组中每管用移液枪吸入700uL的甘油，再分别从1-N中的LB培养液的试管中吸取700uL的菌液放入第一组1-N离心管中，在第二组中每管用移液枪吸入1400uL的菌液。将第一组的离心管放入零下72︒C的冰箱内。将第二组的离心管放入零下20︒C的冰箱内。

2.3  实验结果

在本实验挑到16种菌[4]，培养了16种菌，并分别得到了16种菌的形态，并对其经行了拍照，保存了16种菌。

2.4  菌种形态图

从河沟底泥土壤中分离划线培养得到的菌株。如图2-4所示，16种菌株中一种，命名为GN-1，该菌在LB培养基上生长12d后，菌落呈淡黄色，圆形，直径约为3 mm，表面凸起，光滑，边缘整齐。

河沟底泥微生物菌株土分离鉴定及微生物学特性(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_79935.html