多数研究表明，茎尖组织培养是实现甘薯高频率植株再生的有效途径[6-9]。但是，到目前为止，虽然由甘薯大多数基因型的茎尖组织容易诱导得到胚性愈伤组织，但高频率的植株再生仅限于少数几个基因型。并且，甘薯茎尖剥离比较麻烦，要获得大量茎尖组织相当花费时间。目前,甘薯体细胞胚诱导及分化再生植株方面的研究有一些报道,但除了少数品种、少数外植体外,大多数体胚发生频率及植株再生频率都较低[10-12]。为此，Liu[12]提出可以先由茎尖组织诱导得到胚性愈伤组织，然后再将胚性愈伤组织进行振荡培养，建立胚性细胞悬浮培养系，以便在短时间内获得大量再分化能力高的胚性细胞。目前有关甘薯细胞悬浮培养和甘薯茎尖离体培养时，培养基配方中不同激素配比对其茎芽形成和植株再生影响的研究还较少，Chee和Cantliffe[13,14]以及Chee等[14]曾利用品种White Star建立了一个甘薯胚性细胞悬浮培养系，但其植株再生率不高。文献综述

本研究通过设置不同的实验参数，揭示不同浓度的激动素与不同种类的生长素对甘薯茎尖培养的影响，建立徐薯18甘薯品种的胚性细胞悬浮培养系，并实现其有效植株再生，旨在为甘薯组织培养提供理论依据。

2  材料与方法

 2.1 实验材料

甘薯品种：徐薯18茎尖分生组织作为外植体材料用于离体培养，选用徐薯18离体培养的脱毒苗作为再生体系建立的外植体材料。徐薯18购于徐州甘薯研究所。

 2.2 茎尖组织的获取

   本实验以甘薯茎尖分生组织为外植体材料。选用甘薯茎蔓上健壮枝条和薯块催芽两种方式获得甘薯茎尖。将薯块放在30oC恒温箱内催芽，当幼苗长至30厘米就可剪苗进行茎尖培养。甘薯茎尖获取的流程如下[21]：选取健壮植株顶芽或腋芽0.5-1.0厘米，用适量的洗衣粉搅动洗涤10-15分钟，然后再用清水漂洗干净。将洗好的材料放入超净工作台内，用70%酒精浸泡30秒，再用0.1%汞消毒5-10分钟，最后用无菌水冲洗3-4次。将消毒后的材料置于解剖镜下，除去生长点周围的幼叶，切取附带1-2个叶原基，大小为0.2-0.4毫米的顶端分生组织作为外植体。

 2.3 培养基配置及培养条件

培养基以MS为基本培养基，培养基中蔗糖的含量为3%，琼脂为0.8%，pH值调至5.85－5.89之间，将切取的甘薯顶端分生组织置于含有不同激素的培养基上：① MS+6-BA 0.5mg/L ②MS+6-BA0.5mg/L+IAA0.1mg/L ③ MS+2.4-D1.5mg/L ④ MS+2.4-D2.0mg/L ⑤ MS+2.4-D 2.5mg/L进行黑暗培养两个月，培养温度为28oC。

2.4 胚性细胞悬浮培养系的建立

培养6-8周后，将诱导得到的胚性愈伤组织破碎成小细胞团或单细胞，将其移入100mL的三角瓶中，加入20mL的MS液体培养基，该培养基的成分同上述胚性愈伤组织诱导培养基，但不加琼脂。将三角瓶放在水平摇床上，以100r·min-1进行振荡培养，培养条件为27士1℃、每日13h、500lx光照。悬浮培养每隔2周继代1次，继代方法是:将悬浮培养液转入刻度离心管中，在200×g下离心4min，吸去上清液，将直径约0.1mm以上的细胞团破碎后，将约1克的培养物移入30mL新鲜培养基中继续进行悬浮培养。来!自-优.尔,论:文+网www.youerw.com

2.5 植株再生

     悬浮培养24周后，每隔4-5周，将直径约1.0mm的细胞团转移到添加2.0mg·L-12，4-D的MS固体培养基上，在27±1℃、黑暗下培养，使其增殖并促使体细胞胚的形成。转移4-6周后，将增殖得到的胚性愈伤组织进一步转移到添加1.0mg·L-1ABA的MS培养基上，在27士1℃、每日13h、3000lx光照下培养3-4周，使体细胞胚发育成熟并发芽。将获得的小植株转移到MS基本培养基上，在相同条件下培养，以获得完整植株。 甘薯茎尖离体培养及植株再生体系建立(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_81176.html