分离膜蛋白的方法有三种：冷热交替法，先使之与其他物质分开，然后再进行提取膜蛋白[19]；用特殊的去污剂选择性的分离法；膜蛋白色谱次序抽提法，按照细胞蛋白溶解性的悬殊这一特点，利用拥有不一样溶解能力，从而对蛋白溶解液举行抽提的办法[20]。

通过本次试验，便是为了掌握筛选菌株的要领，铁氰化钾[K3Fe（CN）6]还原法和TTC（氯化三苯四氮唑）法，学会细胞膜蛋白的获取方法即用特殊的去污剂选择性的分离法。

2 实验材料与步骤

2。1实验材料与试剂

扁桃酸（BR，上海国药集团化学试剂有限公司），酵母粉（BR，北京奥博星生物技术有限公司），蛋白胨（BR，上海国药集团化学试剂有限公司），琼脂（石狮市环球琼胶工业有限公司），曲拉通TritonX-100，TTC，盐酸，三价氯化铁，甲醇，铁氰化钾，磷酸氢二钠，柠檬酸，硫酸铵，D-苯甘氨酸，氢氧化钠，葡萄糖，氯化钠，均为国产试剂。

2。2实验仪器

飞利浦搅拌器（HR2860，广东省珠海市经济特区PHILIPS家庭电器有限公司） ，精密电子天平（BS210S，北京Sartorius天平有限公司），电热恒温培养箱（MIR-162，日本三洋电器有限公司）高速冷冻离心机（himac CR 21G，日本HITACHI股份有限公司）超声波细胞破碎机（JY96，宁波新芝生物科技股份有限公司），微量移液枪（Eppendorf公司，Bio-Rad公司），紫外/可见分光光度仪（U-1800，昆明宝信捷生物应用设备有限公司），高温灭菌锅（MLS-3020，日本三洋SANYO公司），PH计（PHS-3D，上海精科)，冰箱（BCD-209SN，青岛市海尔Haier集团公司），超净工作台（SW-CJ-1B,，苏净集团苏州安泰空气技术有限公司)，超低温冰箱（MDF-192，日本三洋电器有限公司)，超声波清洗机（As3120，AUTOSCIENCE公司）

2。3实验步骤

2。3。1产D-苯甘氨酸脱氢酶菌株的富集培养

从学校附近的水池采集水样，去树林采集土壤样品，然后将其混合，用磁力搅拌器进行搅拌，直至形成浑浊的均匀液体，放置冰箱备用。

配置富集培养基：来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

a。扁桃酸富集培养液：葡萄糖0。1g，氯化钠0。1g，酵母粉0。1g，蛋白胨0。2g，扁桃酸0。1g，加入无菌水至20ml，用1M HCl 或者1M NaOH调节PH至7。0。

扁桃酸在扁桃酸脱氢酶作用下生成苯乙酮酸，同理，如果苯甘氨酸脱氢酶是以NAD为辅的一种酶，可以可逆催化氨基酸脱氨生产苯乙酮酸、氨及NADH，苯乙酮酸也可以可逆地生产苯甘氨酸。

b。D-苯甘氨酸富集培养液：葡萄糖0。1g，氯化钠0。1g，酵母粉0。1g，蛋白胨0。2g，D-苯甘氨酸0。1g，加入纯净水至20ml,用1M HCl 或者1M NaOH调节PH至7。0。

培养基封口后于121摄氏度灭菌15min，经过灭完菌后的培养基放置在超净工作台上，打开超净工作台，待温度冷却至30摄氏度左右时，取放置在冰箱备用的样品悬浮液1ml于扁桃酸富集培养液中，然后放在保温箱中，设定温度30摄氏度，振荡培养12h。

取出培养好的菌液，用微量移液枪量取1ml菌液，添加到D-苯甘氨酸富集培养液中，此过程均要在超净工作台上进行，然后再将其放置于恒温培养箱，设置温度30摄氏度，振荡培养12h。