《无公害食品-禽肉及禽副产品 NY 5034-2005》两项标准，规定了土霉素、金霉素、磺胺 类以及环丙沙星每公斤的含量均应少于0。1 mg，克球酚少于每公斤0。05 mg；FAO和WHO 要求，8种主要抗生素残留限量(mg/kg)链霉素和金霉素0。50 mg，新霉素0。20 mg，竹桃霉素 0。10 mg，青霉素0。018 mg，杆菌肽4。8 mg，土霉素和四环素0。3 mg[9]。近年来欧盟许多国家 开始禁止所有抗生素饲料添加剂作为生长促进剂在动物身上的使用，韩国农林水产食品部 2011年5月31日表示，韩国政府计划从2011年7月1日起全面禁止在动物饲料中添加抗生素。

作为人类理想的天然食品——鸡蛋，不仅因其营养价值全面，还因营养的吸收和利用 率可达98%而被人们广泛食用。当今消费者不仅关注食品的营养更加关注此类产品安全， 研究方便、低成本、快捷的鸡蛋抗生素快速检测技术，准确的将鸡蛋中抗生素残留检测[10-12] 出来，建立消费者对蛋鸡行业食品安全的信心，提升产业的抗风险能力，势在必行。目前 国内外对农产品中抗生素残留的检测方法主要有微生物法[13]、色谱法[14]和酶联免疫法[15] 三种。其中色谱法和酶联免疫法成本较高，微生物法操作较繁琐且耗时较长，本研究在 Pikkemaat等提出了NAT-筛选法(Nouws antibiotic test)的基础上[16]，利用嗜热脂肪芽孢杆菌

为出发菌种，根据抗生素对微生物的生理机能、代谢等的抑制作用[17]，和该菌株对青霉素 非常敏感，且生长速度快的特点[18]，采用酸性指示剂定性检测样品中抗生素残留的方法， 开发鸡蛋中抗生素快速检测数控检测盒。

2 材料方法

2。1 菌种

嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus Stearothermophilus）ATCC7953，购自中国普通微生物菌 种保藏管理中心。

青霉素标准品(中诺药业（石家庄）有限公司，产品批号016131242，160万单位），溴 甲酚紫，酵母粉，牛肉膏，葡萄糖（AR）为国药试剂。

2。2 培养基

检测培养基：牛肉膏2。5g，葡萄糖10g，酵母粉2g，溴甲酚紫指示剂0。03g，蒸馏水定 容至1000mL，pH 6。8～7。2。

产芽孢培养基[19]：蛋白胨6。0g、胰蛋白胨3。0g、酵母粉3。0g、牛肉粉1。5g、琼脂15g、

MnSO4为0。001g、CaCl2为0。16g、MgSO4为0。07g、蒸馏水1000mL。

2。3 菌液的制备

将嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢培养物，接种于无溴甲酚紫的检测培养基斜面上，60℃条件 下活化培养2h后，置于60℃下培养24h，得嗜热脂肪芽孢杆菌营养细胞培养物。用0。9%的 无菌生理盐水溶液洗涤，制成425nm处OD值在2。0左右的菌悬液（此处最佳浓度的标准是： 菌浓度在检测培养基上培养时与培养基颜色变化的最佳观测时间，即在最短时间内看到最 明显的培养基颜色的变化）备用。

2。4 芽孢干粉管的制备

将菌种接种于产芽孢培养基上，56℃培养 10d，采用芽孢专用染色法镜检要求芽孢率 达 90%~95%。在无菌条件下用已灭菌的 0。9%的生理盐水洗脱菌苔，8000r/min 离心 15min， 倾去上清液，再用已灭菌的 0。9%生理盐水冲洗离心，重复 2 次，最后用已灭菌的 0。9%的 生理盐水制成芽孢悬液，调浓度为 108~109cfu/mL。向每个 1。5mLdoff 管中加入 0。3mL 菌悬 液 8000r/min 离心 15min，弃上清液，烘干，得芽孢干粉管。文献综述

2。5 加热装置的制作

加热装置由加热块、绝缘板、LED 显示器、温度传感器、温度控制器、开关等组成。 加热块采用了铝制材料。因为铝具有散热均匀、热传导快、散热面积大等特点，符合相关 要求。选取合适大小的铝制加热块，在加热块上钻取培养皿孔槽，将温度传感器嵌入加热 块中间，将温度传感器上的引线接入 LED 显示器、温度控制器、开关，把接好的模块放置 入制作好的绝缘盒中，在控制面板上固定好 LED 显示器、温度控制器、开关的位置，引出 开关线插头即可。同时，在使用时，要使用电源转换器，将 220V 转换成 24V，确保装置正 常工作。 禽蛋中β-内酰胺类青霉素类抗生素快速检测试剂盒的研制(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_86349.html