黄瓜无需特别光周期诱导就能自主开花，营养生长期较短，作为重要的经济作物，其胁迫耐受能力非常重要。我们前期的研究已证实了拟南芥生长素受体参与盐胁迫下的转录调控，影响了植株的盐胁迫耐受性。我们也已克隆获得了黄瓜中的生长素受体同源基因CsTIR，但其功能尚不明确。本研究利用模式植物拟南芥作为研究材料，考察转黄瓜CsTIR基因的拟南芥对盐胁迫耐受性的影响；统计转基因与野生型种子在高盐培养基上的萌发率；观测比较幼苗在高盐培养基上的生长情况；测量成年植株抗逆境生理指标。期望通过本研究探索CsTIR基因的潜在功能，研究其对拟南芥盐胁迫耐受性的影响，为黄瓜生长素受体的功能研究和其潜在的耐盐机制研究提供新的数据，为生产实践提供参考。

1 黄瓜CsTIR基因影响拟南芥的盐胁迫耐受性

1。1 材料与方法

1。1。1 材料

用于盐胁迫耐受性实验的拟南芥包括：Columbia-0野生型，转基因纯合CsTIR-4，CsTIR-6，CsTIR-22拟南芥在光照培养室内培养，控制恒温22~24 ℃，湿度60%，16 h光照/8 h黑暗。

1。1。2 主要试剂和主要使用仪器

主要试剂：NaCl，B5培养基（sigma），70%酒精，10% NaClO，无菌水

主要使用仪器：高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，恒温恒湿光照培养箱，pH计，纯水仪等仪器。

1。1。3 盐胁迫下种子萌发率统计

①配制8个B5培养基，其中4个加300 mmol/L的NaCl，另4个不加。

②取4个1。5 ml的离心管，将适当的4个株系的拟南芥种子（其中1个株系为野生型，另3个株系为转黄瓜CsTIR基因的拟南芥种子）分别置于1。5 ml的离心管中，加入1 ml 70%酒精混匀3 min，小心吸除酒精。文献综述

③加入1。5 ml 10% NaClO震荡混匀10 min，吸除NaClO。

④用无菌水1 ml清洗种子4~5次，吹打清洗。

⑤第5次时加入1。5 ml无菌水混匀后静置10 min，再清洗1~2次。

⑥取少量无菌水于离心管，混匀，用灭菌的1 ml移液器将每个株系消毒后的种子分别播种于含NaCl（300 mmol/L）和不含NaCl的B5培养基上进行培养。每个培养基60~80颗种子，透气胶带封口后，置于4 ℃冰箱中2 d，春化破除种子休眠。

⑦将培养皿垂直放置于光照培养箱培养。设置光照强度4000 lx，恒温22~24 ℃，恒湿60%，16 h光照/8 h黑暗。对种子露白萌发的进行统计，间隔一天统计一次。

1。1。4 盐胁迫下幼苗根的生长情况统计

①配制4个圆形B5培养基（不加NaCl），8个方形B5培养基（其中4个加300 mmol/L的NaCl，另4个不加）。

②取4个1。5 ml的离心管，将适当的4个株系的拟南芥种子（其中1个株系为野生型，另3个株系为转黄瓜CsTIR基因的拟南芥种子）分别置于1。5 ml的离心管中，加入1 ml 70%酒精混匀3 min，小心吸除酒精。

③加入1。5 ml 10% NaClO震荡混匀10 min，吸除NaClO。

④用无菌水1 ml清洗种子4~5次，吹打清洗。

⑤第5次时加入1。5 ml无菌水混匀后静置10 min，再清洗1~2次。

⑥取少量无菌水于离心管，混匀，用灭菌的1 ml移液器将每个株系消毒后的种子播种于圆形B5培养基上进行培养，每个培养基60~80颗种子。透气胶带封口后，置于4 ℃冰箱中2 d，春化破除种子休眠。

⑦将培养皿垂直放置于光照培养箱培养。设置光照强度4000 lx，恒温22~24 ℃，恒湿60%，16 h光照/8 h黑暗。

⑧在光照培养箱培养5d后，将每个株系的幼苗分别移到含NaCl（300 mmol/L）和不含NaCl的方形B5培养基上进行培养，每个培养基20棵幼苗，仍置于光照培养箱培养。每2 d统计一次根的生长状况（包括根长和侧根数）、存活率、叶颜色变化。 黄瓜CsTIR基因影响拟南芥盐胁迫耐受性的研究(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_87945.html