发酵培养基:0。2% YNB,1%葡萄糖,5 mmol/L乙酰胺(分子量59 g/mol),用0。1 M磷酸缓冲液(pH 6。0)配制,121 ºC高温灭菌20 min。250 mL锥形瓶装液量50 mL。(乙酰胺需过滤除菌)。A液:锥形瓶中加入0。1g YNB粉末和24 mL 磷酸缓冲液(pH 6。0)。 B液:锥形瓶中加入0。5g葡萄糖和25 mL磷酸缓冲液(pH 6。0)。将A液和 B液放入灭菌锅121 ºC高温灭菌20 min。在超净工作台上将A液和B液混合,再加1 mL乙酰胺,混匀。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-
2。2。2试剂
DNS:将1416 mL蒸馏水、19。8g氢氧化钠和10。6 g 3,5-二硝基水杨酸混合,溶解后加入306g酒石酸钾钠、7。6mL苯酚(50℃熔化)、8。3g偏重亚硫酸钠,避光存储。
5 mmol/L 乙酰胺:称量1。475g乙酰胺溶于100 mL的0。1 M磷酸缓冲液(pH 6。0)中,过滤除菌,分装在1。5 mL的EP管中。-20℃冻存备用。
0。1 M磷酸缓冲液(pH 6。0):1 L蒸馏水中加入13。682 g二水磷酸二氢钠和4。405 g十二水磷酸氢二钠。
2。0%菊粉底物:称取2。0 g菊粉,加入约50。0 mL蒸馏水,60-70ºC水浴,慢慢搅拌直至菊粉完全溶解,冷却后加入10。0 mL 0。1 M磷酸缓冲液(pH 6。0),并加水至100。0 mL,-20 ºC保存。
10 mg/mL的果糖标准溶液:用电子天平准确称量100 mg果糖溶于10 mL蒸馏水中,充分混匀。
重组马克斯克鲁维酵母产菊粉酶发酵条件优化(3):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_88092.html