油菜是重要的油料作物，也属于花卉类蔬菜，鲜嫩的油菜花可食用，富含蛋白质、氨基酸、脂质、碳水化合物等多种营养物质，及钙、铁、锌、硒等微量元素。油菜花中黄酮类化合物含量丰富，油菜蜂花粉黄酮主要为黄酮醇苷类，主要包括槲皮素、山奈酚、异鼠李素、柚皮素、芦丁；其中经核磁鉴定的化合物有：山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3,4’-双-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-( 1→2) -β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D -葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-新橙皮糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-( 1→2) -O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷、5,7,4’-三羟基-8-甲氧基黄酮醇-3-O-β-D-槐糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-( 1→2) -β-D-吡喃葡萄糖苷[3-5]。

黄酮类化合物是植物体内重要的次生代谢产物，具有多种生物活性如抗癌、抗病毒、抗菌等，其生物活性的基础是抗氧化性。目前已经建立了多种方法用于评价黄酮类化合物的抗氧化活性，大体上分为体内实验法和体外实验法。体内实验法与人体的实际体系相近似，具有一定参考性，但实验相对复杂，耗时长，不适合大量样品的抗氧化活性筛选或粗筛。体外实验法主要有生物评价方法和化学评价方法。生物学评价方法只能反映抗氧化物质的一部分抗氧化活性，而且成本也比较高。化学评价方法相对易于操作，所需费用低，适于初筛。黄酮类化合物抗氧化清除自由基的作用机制有三类：（1）通过酚羟基与自由基进行抽氢反应生成稳定的半醌自由基，中断链式反映；（2）用过抗氧化剂的还原作用直接给出电子；（3）通过抗氧化剂对金属离子的络合降低需金属离子催化的反应[6,7]。黄酮类化合物的抗氧化能力与其结构有关，B环上有3’,4’邻二酚羟基的黄酮抗氧化能力最强；B环无抗氧化作用时，A环上邻苯二酚结构可以补偿起抗氧化作用[8,9]。应用比较广泛的化学评价方法有还原金属离子型方法，清除自由基型方法，抑制过氧化型方法等。下面主要介绍3种清除自由基型方法。

对O2-▪的清除，O2-▪可将氮蓝四唑还原为不溶于水的蓝紫色物质，在560nm处有最大吸收峰，若被测物质具有抗氧化活性，O2-▪对氮蓝四唑的还原能力将减弱，用分光光度法测定出氮蓝四唑还原产物可以反映物质抗氧化的活性。

对▪OH的清除一般采用Fenton反应分光光度比色法来测定。根据氧还指示剂邻二氮菲Fe2+的颜色变化可判断溶液氧化还原状态的改变，H2O2/Fe2+体系通过Fenton反应产生羟自由基，还原邻二氮菲Fe2+为Fe3+，使得最大吸收峰在536nm处消失。需要注意的是，测定时加样方法对结果有重要影响，先将邻二氮菲、PBS及水混匀，并且每管加入FeSO4后立即混匀，否则会使局部颜色过浓，影响结果的重复性。

对有机自由基（DPPH▪）的消除，二苯代苦味酰基自由基（DPPH▪）是一种稳定的以氮为中心的自由基，可在乙醇溶液中显紫色，在500-520nm有最大波长吸收峰。以分光光度法测定加抗氧化剂或样品提取液后DPPH溶液的吸光值，其下降程度与接受的电子，即抗氧化剂清除自由基活性呈定量关系，从而代表抗氧化性的强弱。值得注意的是，DPPH自由基初浓度不应超出分光光度计的准确范围，且为了准确评估反应时间，最好进行混合体系的吸光值随时间变化实验，以免造成因反应未达稳定状态而数据不准确的错误。DPPH同时又能与任何提供电子的化合物发生反应，反应前应对提取液进行脱盐化处理或纯化处理。实验过程中注意避光，DPPH自由基溶液现配现用并注意其刺激性[10]。 转基因油菜花黄酮提取物对自由基清除能力的测定(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_89220.html