2。 实验材料与方法
2。1 实验材料
油菜花品种:抗草甘膦油菜Q3(加拿大引进“Quest”的高世代品系)、抗草胺膦油菜“Z7B10”(中国农科院油料所培育)、普通油菜“中双7号”、普通油菜“中双10号”。来~自,优^尔-论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-
解剖镜,镊子,剪刀,培养皿,烧杯,不同浓度的乙醇(70%,80%,90%,95%,100%),去离子水,称量瓶,生理盐水,干燥器,QANTA FEG -450型扫描电子显微镜,2。5%戊二醛,1%锇酸等。
附:2。5%戊二醛的配制
先配制好0。2M磷酸缓冲液,取2。6g的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)和2。9g的磷酸氢二钠(Na2HPO4·H2O)加双蒸馏水至500ml,最后将PH调至7。4,备用。然后取1mol的25%戊二醛和4ml的双蒸馏水以及5ml 0。2mol/L磷酸缓冲液最后将PH调至7。3-7。4,即为2。5%戊二醛固定液。
2。2 扫描电镜制样方法
将材料分别置于解剖镜下用镊子轻轻取下花的其他结构,只留下蜜腺。将蜜腺在4℃条件下经2。5%戊二醛固定2小时以上,0。1M磷酸缓冲液冲洗三到四次,每次15分钟;再用1%锇酸固定2小时,0。1M缓冲液冲洗三到四次,每次15分钟;然后需要不同浓度乙醇(50%,70%,80%,90%,95%,100%)作为脱水剂,对样本进行逐级脱水,每级时间15分钟。脱水后取出放在CO2临界干燥仪上干燥1。5h。用双面胶将样品粘于扫描电镜样品台上,样品表面用离子喷溅法镀金,最后用扫描电镜进行观察拍照。
转基因油菜蜜腺的扫描电镜观察(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_89743.html