Importin包括α和β两个家族，IMPα是接头蛋白，其ARM (armadillo domain)结构域可识别并结合货物蛋白(cargo)中的核定位信号(nuclear localization signal, NLS), IβB结构域(importin-β-binding domain)则可与IMPβ结合[8,9]。在分子跨核运输中，IMPβ既可通过IMPα与货物蛋白结合，亦可直接形成IMPβ-货物蛋白复合体[9]。

据报道，拟南芥中至少含有27种IMP基因，其中9种为IMPα家族，另外18种属于IMPβ家族[4]。1994年，Görlich D等人发现首个拟南芥核IMPβ家族的入核转运蛋白IMPβ/KAPβ1[10]。1996年Hichs G R等人克隆到了第一个拟南芥IMPα基因[11]。1999年，Haasen D等人发现拟南芥IMPβ家族的出核转运蛋白AtXPO1A[12]。近年来，关于拟南芥IMP的研究愈发深入，一些蛋白的功能已被确定。例如，XPO1与细胞分裂和胚胎发育有关[13-14]，XPO5可以促进生殖生长[15]，SAD2不仅是脱落酸(abscisic acid, ABA)信号通路的组成元件，还参与UV-B的响应[16-18]然而，PLANTKAP是IMPβ家族的一个新的分支，仅存于陆生植物中[19]，目前对于其功能报道很少。实验室前期通过筛选IMP家族所有突变纯合子，而后用病原细菌Pseudomonas syringae pv。 tomato毒性菌株DC3000对其进行侵染试验，发现plantkap突变体丧失了SAR发生发展的能力，且其对抗病性的影响与水杨酸信号通路有关。另外，Li Xin课题组发现MOS6/IMPα-3亦对水杨酸信号转导有调控作用，影响SAR的发生发展[20-21]。

SAR是植物在局部受病原菌侵染后，可诱导整株产生抗性的一种机制，这种免疫能力可在体内保持很长时间，且具有广谱性[22-24]。实验证明，水杨酸是诱导植物产生SAR的一个重要信号分子[25-27]，水杨酸积累诱导H2O2在胞内积累，改变了了氧化还原电位，使低聚体NPR1分子间二硫键断裂形成单体，进入细胞核激活下游相关蛋白(pathogenesis related protein, PR)的基因表达[28-31]。在此基础上，通过克隆拟南芥中NPR1、PLANTKAP、IMPα-3基因，构建基因表达载体，利用酵母双杂交技术进行蛋白互作分析，以明确PLANTKAP在调控抗病性方面所发挥的功能。

1材料与方法论文网

1。1实验材料

1。1。1植物材料及菌株

植物材料：野生型拟南芥Col-0（培养条件：22-25 oC，8小时光照）。

菌株：大肠杆菌菌株DH5α，酵母菌株AH109。

1。1。2常用酶

各类限制性内切酶、PrimeScriptTM 1st Strand cDNA Synthesis Kit购自TaKaRa公司。T4连接酶购自于北京擎科新业生物技术有限公司。琼脂糖凝胶回收试剂盒及DNA marker购自于翼飞雪生物科技公司。质粒纯化试剂盒购自于OMEGA。

1。1。3培养基、常用试剂及其配制

LB培养基：称取10 g胰蛋白胨，5 g酵母提取物，10 g NaCl，然后去离子水定容至1 L，121 oC，灭菌20 min。固体培养基则另加15 g琼脂粉。

YPDA培养基：称取20 g蛋白胨，10 g酵母提取物，去离子水定容至935 ml，121 oC，灭菌20 min。使用前分别按15 ml/L和50 ml/L比例加入已经灭过菌的0。2%腺嘌呤和40%葡萄糖。

营养缺陷型(SD)培养基：称取6。7 g无氨基酸酵母氮源(YNB)，20 g琼脂，量取100 ml 10× DO，混合，用去离子水定容至850 ml，PH调至5。8，121 oC，灭菌20 min。使用前，按50 ml/L比例加入40%的葡萄糖。

10× DO: 配制1 L 10× 无缺陷DO中所需的所有氨基酸：L-Adenine hemisulfate salt, L-Arginine HCl, L-Histidine HCl monohydrate, L-Methionine, L-Tryptophan, L-Uracil各需200 mg; L-Isoleucine, L-Lysine HCl, L-Tyrosine各需300 mg; L-Phenylalanine需要500 mg; L-Leucine需要1000 mg; L-Valine需要1500 mg; L-Threonine需要2000 mg。根据所需不同营养缺陷型，去除相应成分，即为缺陷型DO。本实验需要10× -Leu/-Trp DO溶液和10× -Leu/-Trp/-His/-Ade DO溶液。文献综述 拟南芥核输入载体PLANTKAP调控抗病性的机制(2):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_95663.html