致 谢 37

参考文献 38

附录 39

附录一：测序峰图和 coe 基因序列 39

第一章 绪论

1。1  冠状病毒简介

1。1。1  冠状病毒分类学

从核酸类型来看，冠状病毒归属于单股正链RNA病毒，归属于巢状病毒目，冠 状病毒科，冠状病毒属。观察冠状病毒电镜照片，可见冠状病毒整体呈现出类似于 古代帝王皇冠形状的外形，因此被命名为冠状病毒。依据冠状病毒的抗原性之间的 差异，可以将典型的冠状病毒大致分为3群[1, 2]。其中的第1群和第2群是只能侵染哺 乳动物的哺乳动物病毒，第3群为能够侵染禽类的禽类病毒，每一类群所包含的常见 冠状病毒为：

图 1-1 冠状病毒分类

Fig。 1-1 Coronavirus classification。。

上图中分类到第3群的犬冠状病毒、大鼠涎目腺炎病毒和人肠道冠状病毒其准确 性还不确定，有待于进一步的研究。非典型肺炎病毒（SARS-CoV）由于其基因组 与已知的冠状病毒的基因序列同源性都不高，因此有人认为应当将其列为一类新的

冠状病毒[3, 4]。冠状病毒的成熟颗粒直径约为60nm-220nm，其核酸RNA链全长约为 27-31kb[4-6]。典型的冠状病毒表面具有囊膜结构，并且在囊膜上覆盖着长约12-24nm 的纤突，在电镜下观察可以发现纤突末端呈球状，纤突规则地排列在囊膜表面，冠 状病毒类似于皇冠的外形正是由这些规则排列的纤突形成的。病冠状毒颗粒的囊膜 为脂双层结构，在脂质双层中穿插有两种蛋白质：纤突蛋白（S）和膜蛋白（M）； 部分冠状病毒，如BCoV、HEV、HCoVOC43 和TCoV 的囊膜上还有第三种蛋白， 称为血凝素糖蛋白（HE）；冠状病毒颗粒内部由RNA和核衣壳蛋白（N）组成，呈 螺旋式结构，直径为9-16nm[5, 7]。论文网

图1-1展示的是曾在2002年和2003年的冬春之交肆虐全球的严重急性呼吸综合征

（非典型肺炎）的病原体SARS病毒与其他典型的冠状病毒的分类关系。通常可以将 典型的冠状病毒划分为3个类群，但是SARS病毒因为其基因组与其他的冠状病毒差 异性较大，同源性较低，因而研究者将其独立划成一个类群。

1。1。2  冠状病毒在细胞内的生活史

冠状病毒首先将基因组核酸注入宿主细胞，在病毒基因组进入宿主细胞后，首 先借助宿主细胞的复制和转录系统，翻译出病毒装配和增殖的相关蛋白，在细胞内 完成病毒颗粒的装配过程后，以出芽的方式从宿主细胞中释放出来，完成一个生命 周期。冠状病毒在完成其结构蛋白的翻译和基因组RNA复制之后，借助宿主细胞的 内质网完成装配(assembly)过程，从而生成新的冠状病毒颗粒，再借助宿主细胞的高 尔基体的包装分泌到宿主细胞外。

图1-2显示的是冠状病毒侵入宿主细胞的大致过程。病毒借助衣壳上的刺突插入 到宿主细胞细胞膜上并与宿主细胞膜上的特异性受体结合，与受体的特异性结合使 得病毒发生构象变化，病毒基因组核酸可以借助这一构象变化穿过宿主细胞膜进入 细胞，此后病毒就可以借助注入宿主细胞的基因组核酸进行复制和繁殖。

1。1。3  冠状病毒在细胞内的复制

冠状病毒基因组是一个无分段正义单链RNA,其基因组RNA(Genomic RNA)长度 在27-31kb之间。冠状病毒基因组RNA链具有一个正链RNA病毒特有的重要结构特 征:其RNA链5`端具有甲基化帽(methylated cap)结构，3`端具有PolyA尾的结构。这一 结构，十分类似于真核生物mRNA的结构 ，也是冠状病毒基因组 RNA 仅依靠自身 就可以作为模板进行翻译的重要的结构基础。冠状病毒进入细胞后先后经过的转 录、翻译、复制、装配和出芽等过程，实现病毒的繁殖扩增。冠状病毒的另一个与 其复制相关的重要结构特征是，在成熟的冠状病毒颗粒中，并不存在RNA病毒复制 所依赖的RNA聚合酶(Viral RNA polymerase)。为了解决这一问题，冠状病毒采取的 策略是，在它侵入宿主细胞之后，首先会直接以其基因组RNA作为翻译模板，先行 表达出病毒RNA聚合酶(Viral RNA polymerase)，然后再利用生产出来的病毒RNA聚 合酶完成负链亚基因组RNA (sub-genomic RNA) 的转录合成、各结构蛋白mRNA 的 PEDVS蛋白COE区域在BL21（DE3）菌中的表达与SDS-PAGE鉴定(4):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_98620.html