合成以及病毒基因组RNA的复制。此外还有一个需要特别说明的特征是:用于翻译 冠状病毒各个结构蛋白的基因组mRNA,并不存在转录后修饰,例如剪接、编辑等 过程,而是直接在转录过程中,利用 RNA 聚合酶和一些转录因子,并且使用一种称 为“不连续转录”(discontinuous transcription)的转录机制,通过识别某些特定的“转 录调控序列”(transcription reguLating sequences ,TSR),从负义链 RNA 上有选 择性地一次性转录出一个成熟mRNA的全部组成部分。图1-3展示的是冠状病毒在宿主细胞内的复制的大致过程,其详细的过程较为复 杂。首先是冠状病毒的正义RNA链利用宿主细胞的聚合酶复制出与之配对的负链, 再以负链合成新的正链。正链可以翻译出病毒转录和复制所需的蛋白质,至少包 括:NSP12(一种典型的RNA聚合酶),NSP13(一种解旋酶),NSP14(与RNA 链帽结构的形成有关),NSP16(也是与RNA链帽结构的形成有关)等。在完成 RNA的复制和蛋白质的合成之后,装配形成病毒颗粒,最后从宿主细胞中释放出 去。
1。1。4 冠状病毒基因组结构文献综述
冠状病毒的基因组为不分段单链正股RNA,其RNA长度是至今已知的RNA病毒 当中最长的,可以达到27-32 kb。冠状病毒的基因组mRNA具有感染性,在侵入相应 的宿主细胞后可以引发相应的感染症状,同时冠状病毒的基因组mRNA可以直接作 为翻译病毒蛋白的模板。典型的冠状病毒基因组包含了6-12个开放阅读框(ORF),并且具有5′帽子(cap)结构和3′Poly(A) 尾结构,这与真核细胞mRNA的结构类似,也是冠状病毒的基因组mRNA可以直接作为蛋白翻译的模板
于翻译的重要分子基础。冠状病毒的整个基因组包含大约7-10个功能基因,其中有4-5个负责编码结构蛋白,非结构蛋白基因排布在结构蛋白基因之间。在所有的冠状 病毒的基因组中,聚合酶基因(Pol)和基因组中的3种结构蛋白基因的排列顺序是 固定的,都是5'-pol-S-M-N-3',其他的基因,包括编码病毒非结构蛋白的基因和编码 血凝素糖蛋白(HE)的基因在数目、核苷酸序列和基因排列顺序上往往依不同的冠 状病毒而具有较大的差异[5, 8]。1。2 猪流行性腹泻病毒病原学
1。2。1 猪流行性腹泻病毒的分类地位
研究人员将 PEDV(猪流行性腹泻病毒)归类为冠状病毒科(Coronviridae)、冠状病 毒属(Coronavirus)第一亚群成员。与 PEDV 属于同一病毒属的还有一些常见的成 员,例如猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、犬冠状病毒(CCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猫肠炎冠状病毒(FECV)以及人冠状病毒
229E (HCV229E)。来:自[优E尔L论W文W网www.youerw.com +QQ752018766-
1。2。2 猪流行性腹泻病毒的结构及理化特性
成熟的PEDV颗粒形态与典型的冠状病毒十分相似。从粪便样品中分离的PEDV 颗粒外形多为直径95-190nm的球形,表面覆盖有一层囊膜,其上具有花瓣状的规则 排列的纤突,纤突长18-23nm[9, 10]。PEDV对乙醇和氯仿敏感,蔗糖密度 1。18g/mL[9]。PEDV不凝集猪、鼠、家兔、雏鸡、犬、马、山羊、母牛、绵羊和人等 的红细胞。经60°C以上温度处理30min即可使适应细胞培养的PEDV失去感染力,但 在50℃条件下相对稳定;病毒在4°C、 pH 5。0-9。0以及37°C 、pH 6。5-7。5时稳定;经 超声波处理或反复冻融后,病毒感染力不受影响;5-碘-2-脱氧尿苷不能抑制病毒的 复制,这表明病毒核酸为RNA[9]。
PEDVS蛋白COE区域在BL21(DE3)菌中的表达与SDS-PAGE鉴定(5):http://www.youerw.com/shengwu/lunwen_98620.html