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2.2实验流程 9
3 实验方法与材料 10
3.1实验材料 10
3.1.1养菌过程 10
3.1.2主要药品和试剂 10
3.1.3主要仪器 11
3.2实验方法 11
3.2.1紫外-可见分光光度法确定最适宜的检测波长 11
3.2.2优化影响显色反应的因素 11
3.2.3实验的抗干扰性测定 13
3.2.4标准曲线的绘制 14
3.2.5乙酸的线性范围测定 15
3.2.6加标回收率 16
3.2.7相对标准偏差（RSD） 16
3.2.8 腈水解酶活性的测定 17
4 结果与讨论 18
4.1紫外-可见分光光度法确定最适宜的检测波长 18
4.2优化影响显色反应的因素 18
4.2.1 盐酸羟胺浓度对显色反应吸光度的影响 18
4.2.2 N,N'-二环己基碳二亚胺（DCC）浓度对显色反应吸光度的影响 19
4.2.3 氯化铁浓度对显色反应吸光度的影响 20
4.2.4 反应时间对显色反应吸光度的影响 21
4.2.5 水浴时间对显色反应吸光度的影响 22
4.3实验的抗干扰测定 22
4.3.1甲醇浓度对显色反应吸光度的影响 22
4.3.2 二甲基亚砜（DMSO）浓度对显色反应吸光度的影响 23
4.4标准曲线的绘制 24
4.4.1乙酸标准曲线 24
4.4.2氰酸标准曲线 25
4.5乙酸的线性范围 25
4.6加标回收率 26
4.7相对标准偏差（RSD） 27
4.8腈水解酶活性的测定 27
5 总结与展望 28
致 谢 29
参考文献 30
1 研究背景
1.1生物催化剂
1.1.1生物催化剂概述
（1）定义
生物催化剂是指生物反应过程中起到催化作用的游离或固定化细胞各游离或固定化酶的总称[1]。两者本质都是酶，但前者的酶保留在细胞中，后者的酶则是已经从细胞中分离纯化。对于需要利用一种以上的酶和辅酶的复杂反应或者酶不可以游离使用的反应，往往采取全细胞的生物转化的方法，不然为了简单起见，将会选择游离酶。
（2）优缺点
优点：①效率极高 ②高度专一 ③条件温和 ④清洁环保
缺点：生物催化剂的实质是酶，固然有催化效率高等特性，不过在有机溶剂中生物催化剂的稳定性和耐受性都比较低，容易受到有机溶剂的损坏。另外，其催化活性还容易受到溶液pH值和反应温度的影响。而且生物催化剂的发现与改进周期太长，一些有代表性的生物催化加工花费了10-20年的时间才得到了实现。
1.1.2生物催化剂的起源
目前为止，少数的生物催化剂是从动物肝脏[2]或植物[3]中提取的，大部分是来源于微生物细胞。除了真核生物[4]和单细胞酵母(如从南极假丝酵母中能得到高效脂肪CalB[5]) 外，原核微生物是生物催化剂的首要来源。因为原核微生物( 细菌和古生菌) 是地球上出现的最早和数量上最多的生命形态，经历了漫长的演变后，许多微生物为适应恶劣环境而具有了十分高的耐受性，从而可从中得到大量高性能的生物催化剂[6]。现在，虽然微生物培养也有其局限性，如很多生物体用当前技术还无法进行培养[7,8]，但是经过微生物培养从而来获得生物催化剂仍是最普遍、最有效的方法。这是因为微生物的培养能促进生物体的新陈代谢从而增加了其数量，为之后的高通量筛选创造了有利条件。
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