摘要; 手性药物在开发新型药物中起着重大作用。生物催化具有温和的反应条件，高度特异性，独特高效的底物选择性。利用微生物水解酶作为催化剂可在适宜条件下合成手性酸及其酯。本文对来自巧克力微杆箘产酯酶进行发酵优化。本文研究了碳源及其浓度，氮源及其浓度，金属离子及其浓度，pH，温度，IPTG诱导时间，IPTG诱导浓度这几个角度对重组箘产酯酶的影响。实验结果得出了最适的发酵优化条件：麦芽糖30g/L, 玉米浆20g/L, NaCI5g/L, Fe2+ 2.5g/L,IPTG 自发酵液摇床培养3小时后加入，每次加300μL。61899

毕业论文关键词：手性； 手性药物； 酯酶； 生物催化

Optimizing the fermentation of a restructuring esterase EstSIT01

Abstract: Chiral drugs play an important role in the development of new drugs. Biocatalysis has advantages of mild reaction conditions, high specificity, special efficiency and high selectivity in substrate. Chiral acids and its esterase can be synthesized in proper condition by microbial hydrolase, which is used for biocatalyst. The optimizing the fermentation of a restructuring esterase EstSIT01 was studied in this paper. The effect of carbon sources, nitrogen sources, metal ions on enzyme activity , the adding time of IPTG and the concentration of IPTG was all studied in this paper. Finally, the result of the experiment as followed: Maltose: 30 g/L, corn paste: 20 g/L, NaCl: 5 g/L, Fe2+: 2.5 g/L, IPTG was added for 300 μL after three hours. 

Keywords: chirality, chiral drugs, esterase, biological catalysis

1研究背景 1

 1.1 手性与手性药物 1

 1.2 手性药物制备的方法 2

 1.3 生物素 3

 1.4 重组大肠杆箘 4

 1.5 酯酶 4

 1.6 产酯酶的箘种 4

 1.7 酯酶的应用 5

 1.8 微生物与人类的关系 5

  1.8.1 微生物在食品加工业的作用 6

2实验的技术路线和流程 9

 2.1 重组箘的发酵优化的技术路线 9

3实验过程 10

 3.1 主要试剂 10

 3.2 主要仪器 11

 3.3 微生物的生长代谢 11

 3.4 试验方法 12

 3.5 优化前培养条件 13

 3.6 OD值的测定 14

 3.7 酶活测定方法 14

 3.8 单因素实验 14

  3.8.1 碳源单因素实验 14

  3.8.2 氮源单因素实验 15

  3.8.3 金属离子单因素实验 15

  3.8.3诱导剂时间单因素实验 15

  3.8.4诱导剂浓度单因素实验 15

4. 结果与讨论 16

 4.1 碳源优化单因素实验结果 16

  4.1.1 碳源种类对生长及产酶的影响 16

  4.1.2 碳源浓度对细胞生长及产酶的影响