2。3超临界流体萃取法[10]

2。4微波提取法[11]

2。5酶解法[12]

2。6磁场强化萃取法[13]

3马尾松树皮中黄酮类化合物的测定方法

马尾松树皮中黄酮类化合物的测定方法主要包括紫外分光光度法、荧光分析法、毛细管电泳法、高效液相色谱法（HPLC）、薄层色谱法及超临界流体色谱法。

3。1紫外分光光度法

严赞开[15]综述了紫外分光光度法测定植物中总黄酮含量的方法。对于含黄酮类化合物的样品，在经过薄层层析的分离后，测定最大吸收波长处的吸收度利用紫外分光光度计，得到最大的吸收波长后计算含量。这种方法的准确度和精密度都比较高，而且操作简单方便，使用较多。文献综述

3。1。1紫外可见分光光度法

紫外可见分光光度法是以分子吸收光谱为基础，利用某些物质的分子在峰带Ⅰ(300-400nm)和峰带Ⅱ(220-280nm) 光谱区的吸光度的不同来进行定量分析测定的方法。这种方法具有简单便捷、准确度高、精密度和重现性较好、适用范围广等特点，在总黄酮含量分析测定中发挥着重要作用。

3。1。2比色法

    比色法是一些药典中最常用的总黄酮含量检测方法，它主要利用黄酮类化合物结构上的酚羟基和它的还原性进行显色反应，它主要以硝酸铝为显色剂，生成铝鳌合物。在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物的特性。常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有硝酸铝和三氯化铝等。

3。1。3 差示分光光度法

    差示分光光度法是用浓度比待测溶液浓度稍高或稍低于样品的溶液标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度，直接推出待测定溶液的浓度。而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成一定线性关系，借助差示工作曲线进而求出待测溶液中样品的含量。

3。1。4 双波长和导数分光光度法

双波长和导数分光光度法适用于测定吸收光谱的曲线重合的一类混合物中的含量，这种复杂的曲线，但不须解联立方程。这种方法不仅可以测定混合物的含量，还可以分析高浓度及混浊的样品，并且它的灵敏度和精确度比普通分光光度法更好。在选择波长时，除了原则上要与干扰物有相等的吸光度外，还要求两种被测定的物质的波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数要相差的大一些，这样的话方法的灵敏度会更高。如果将上述双波长分光光度计上的两个波长尽可能接近，使之只相差1-2nm，同时进行扫描，能够得到试样一阶导数吸收光谱—吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。

紫外分光光度法，在测定之前要对黄酮类化合物进行显色，显色剂多选用硝酸铝络合体系，显色后的络合物在510nm 处有明显的吸收峰，然后测定其吸光度，最后代入标准曲线中计算黄酮类化合物的含量。紫外分光光度法由于方便快捷在黄酮类化合物的定量分析测定中应用较广泛，但其测定的黄酮类化合物纯度低，易受外界实验条件的影响，准确性难以保障，同时硝酸铝比色发我的专一性较差，测定时受处理过程中颜色变化的影响。因此想要准确测定马尾松树皮中黄酮类化合物的含量，还需再进一步对提取物进行分离纯化。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

3。2色谱测定方法

陈丛瑾、黄克瀛[16]等综述了黄酮类化合物含量的色谱测定方法，包括高效液相色谱、薄层扫描法、超临界流体色谱等，为黄酮类化合物的研究、开发、应用提供参考。

3。2。1高效液相色谱法

    高效液相色谱法（HPLC）是在液相色谱的基础上引入气相色谱的理论和技术，并加以改进而发展起来的一种重要的分离分析方法。其选择性高并且可以排除黄酮类化合物显色时带入体系中的杂质而对测定结果的影响，得到黄酮类化合物的绝对含量，分辨率高，灵敏度好，被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究等各个领域。HPLC分析黄酮类化合物，正相体系一般采用乙烷或异辛烷等体系作为流动相，以极性较大的乙醇、丙醇、乙腈等有机溶剂来进行调节。而反相体系则一般优先选择甲醇/水或者乙腈/水体系为流动相，还需要加入酸来调节pH值从而抑制解离，克服拖尾现象。为了提高分离度需要梯度洗脱，多用C18柱分离[17]。其分离效率高，分析速度快，精确度高且可以连续检测提取物中黄酮类化合物