微生物法合成11α-羟基-ADD的发酵工艺初步研究(2)
2.2.8 正交实验 12
2.2.9 验证实验 12
3 结果与分析 14
3.1 葡萄糖标准曲线的制作 14
3.2 赭曲霉生长曲线的测定 14
3.3 雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮标准曲线 15
3.4 葡萄糖浓度对雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮羟基化的影响 15
3.5 底物浓度对雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮羟基化的影响 16
3.6 淀粉浓度对雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮羟基化的影响 17
3.7 接种时间对雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮羟基化的影响 18
3.8 pH值对雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮羟基化的影响 19
3.9 正交实验 20
3.10 验证实验 21
4 结论 23
参考文献： 24
致谢 26
1 前言
1.1 本课题国内外研究现状概述
1.1.1 11α-羟基雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮简述
11α-羟基雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮（简称11α-OH ADD相对分子量300.4）可由ADD的11α位羟基化制备，属于甾体类药物，其结构式见图1.1。11α位通过羟基化引入高生理活性基团，大大增加疗效，减少副作用。
甾体类药物具有利尿、抗炎、抗毒、抗休克等作用，广泛用于哮喘、风湿病、湿疹、心血管病、淋巴白血病、人体器官移植、抗肿瘤、内分泌失调、皮肤病、细菌性脑炎等，甾体类药物对某些癌症尤其是激素依赖性肿瘤有一定的疗效[1-4]。甾体类药物在医药行业中是仅次于抗生素的第二大类药物。
1.1 11-α-羟基雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮
Fig. 1.1 11-Hydroxy-1, 4 – Androstadiene-3, 17- dione
1.1.2 雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮简述
雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮（简称ADD相对分子量：284.4）物理性状性白色粉末；稳定性：常温下稳定，能溶于有机溶剂，不溶于水。ADD可用植物甾酸或胆甾醇以微生物转化法去除17-位侧链制取，ADD属于17-酮类固醇，是在17-C上有羰基取代物的甾体化合物，其化学结构如图1.2所示。
1.2 雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮
Fig. 1.2 1, 4 – Androstadiene-3, 17 -dione
ADD是重要的甾体类药物中间体，在甾体母环上添加不同的取代基衍生出各种甾体药物。
1.1.3 微生物转化合成甾体类药物研究现状
1.1.4 甾体微生物转化技术及工艺研究现状
1.2 本课题的研究目的和意义
雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮（简称ADD）是重要的甾体类药物中间体，在甾体母环上添加取代基衍生出各种甾体药物。其中之一就是11α位羟基化的ADD（简称ADD）即11α-OH ADD。通过11α位羟基化引入高生理活性基团羟基，大大增加药物疗效，减少副作用，具有较高的药用价值。并且通过微生物发酵进行羟基化，减少了工艺步骤，提高了效率，便于工业化生产。
本实验通过对赭曲霉发酵羟基化雄甾1,4二烯-3,17-二酮生产11α-羟基雄甾1,4二烯-3,17-二酮为研究对象，考察了培养基葡萄糖浓度、底物浓度、淀粉浓度、接种时间和pH值对赭曲霉羟基化性能的影响，并在优化操作条件的基础上，考察了该菌株发酵不同条件下生成11α-羟基雄甾1,4-二烯-3,17-二酮的能力，最后确定最佳的发酵生产11α-OH ADD工艺条件。
通过采用发酵生产11α-OH ADD的最佳工艺条件的研究。为利用ADD生产11α-OH ADD提供理论支持，对进一步实现利用ADD发酵，规模化生产11α-OH ADD具有一定的指导意义。
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